43份黃秋葵種質(zhì)資源遺傳多樣性的形態(tài)學(xué)標(biāo)記及ISSR分析.pdf

1、黃秋葵葉片中含有豐富的葉黃素和β-胡蘿卜素，而且黃秋葵在亞熱帶地區(qū)長(zhǎng)勢(shì)旺盛、生物量高。因而，黃秋葵具備以飼料添加劑的形式作為天然著色劑資源植物栽培和應(yīng)用的優(yōu)勢(shì)條件。 (1)本文采用形態(tài)學(xué)標(biāo)記和ISSR分子標(biāo)記對(duì)43份黃秋葵種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性研究，了解其在形態(tài)學(xué)上的差異及DNA分子水平上的遺傳多樣性及親緣關(guān)系，為進(jìn)一步開(kāi)展黃秋葵新品種選育提供科學(xué)依據(jù)。 (2)通過(guò)對(duì)43份黃秋葵種質(zhì)的22項(xiàng)形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行形態(tài)標(biāo)記，通過(guò)類(lèi)平

2、均法(UPGMA)建立樹(shù)狀聚類(lèi)圖，得出黃秋葵和黃葵在親緣關(guān)系上存在著明顯的差異。 (3)利用改良的CTAB法成功提取了黃秋葵基因組DNA，通過(guò)單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)模板DNA含量、引物含量和2xTaqPCRMasterMix試劑含量3個(gè)因素5個(gè)水平進(jìn)行了優(yōu)化分析，并對(duì)引物的退火溫度進(jìn)行了梯度篩選，建立了適合黃秋葵ISSR擴(kuò)增的反應(yīng)體系和反應(yīng)條件：PCR反應(yīng)體系為15.0μl，其中包括：模板DNA1.0μl(50ng)；ISSR引物1.

3、0μl(10pmol/μl);2xTaq.PCRMasterMix10.0μl；ddH2O3.0μl。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃2min變性一個(gè)循環(huán)；94℃解鏈45s，50℃或53℃退火1min，72℃延伸90s，共38個(gè)循環(huán)；接著72℃延伸5min；最后于4℃短期保存。 (4)依據(jù)優(yōu)化的ISSR反應(yīng)體系，通過(guò)篩選的22條ISSR引物對(duì)43份黃秋葵種質(zhì)進(jìn)行了ISSR-PCR擴(kuò)增，獲得了306(251)條譜帶，其中多態(tài)性條帶271(178

4、)條，多態(tài)性比例為88.6％(70.9％)，各種質(zhì)之間的遺傳相似系數(shù)在0.330～0.954之間，表明黃秋葵種質(zhì)間有著較高的遺傳多樣性。通過(guò)聚類(lèi)分析發(fā)現(xiàn)，在閥值為0.78時(shí)，可將43份黃秋葵種質(zhì)劃分為2大類(lèi)群。第1類(lèi)群為栽培品系(種)，第2類(lèi)群為近緣野生種(黃葵)。這與形態(tài)標(biāo)記的聚類(lèi)結(jié)果基本一致。對(duì)于栽培品種(系)聚類(lèi)，在閥值為0.85時(shí)，可將栽培品種(系)劃分為2大類(lèi)群。第1類(lèi)群為24號(hào)(H009)品種(系)，其余栽培品種(系)劃分為