卵巢癌發(fā)生與侵襲轉(zhuǎn)移機制的初步蛋白組學研究.pdf

1、第一部分 不同亞型上皮性卵巢癌細胞與正常卵巢生發(fā)上皮細胞的蛋白質(zhì)譜比較 目的：分析體外培養(yǎng)的不同亞型上皮性卵巢癌細胞株蛋白質(zhì)表達差異，為篩選上皮性卵巢癌的腫瘤標志物和進行組織分型提供研究基礎(chǔ)。 結(jié)論：不同亞型上皮性卵巢癌細胞與正常卵巢生發(fā)上皮細胞的蛋白質(zhì)譜相比較時有共同的差異蛋白；同時，不同亞型的上皮性卵巢癌細胞之間的蛋白質(zhì)譜表達也有差別，相比較可篩選出差異蛋白；這些差異蛋白對進一步篩選新的卵巢癌腫瘤標志物和協(xié)助卵巢

2、癌的組織分型具有重要意義。第二部分 人卵巢癌高、低侵襲轉(zhuǎn)移潛能細胞系差異蛋白的初步分析 目的：比較高、低侵襲轉(zhuǎn)移潛能卵巢癌細胞系的差異蛋白，尋找與侵襲轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)的蛋白。 方法：將卵巢癌細胞系SKOV一3和3AO及第一部分實驗篩選得到的各代細胞亞系(SKOV-3F<,1> SKOV一3F<,2>、SKOV一3F<,3>、3AOF<,1>、3AOF<,2>、3AOF<,3>和3AOF<,4>)進行細胞裂解，提取細

3、胞總蛋白，用BCA蛋白定量法測試蛋白濃度，調(diào)節(jié)各細胞亞系總蛋白濃度至一致。再采用表面增強激光解吸離子化(SELDI)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)的H4蛋白芯片(疏水表面芯片，利用疏水和反向作用捕獲小分子量的肽或蛋白)檢測各細胞亞系的蛋白質(zhì)譜，最后利用蛋白芯片閱讀機(PBS—Ⅱ型)讀取數(shù)據(jù)，獲得的數(shù)據(jù)采用Ciphergen Proteinchip 3.0.2版本的軟件分析。 結(jié)論：1．用SELDI蛋白芯片技術(shù)檢測不同侵襲潛能細胞系蛋白質(zhì)表達差

4、異的方法簡便、敏感性高、重復性好。 2.具有同一遺傳背景，但不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能的各細胞系蛋白質(zhì)譜也不同。 3.采用SELDI蛋白芯片技術(shù)篩選出的差異蛋白，尤其在兩組細胞系中均可篩選出的共同差異蛋白，與卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)，對于研究卵巢癌的侵袋轉(zhuǎn)移機制具有重要意義。第三部分 不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能卵巢癌細胞亞系的篩選 目的：篩選不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能的卵巢癌細胞亞糸。 方法：將卵巢癌細胞系sKOV-

5、3和3A0分別接種于裸鼠腹腔，建立卵巢癌腹腔轉(zhuǎn)移的裸鼠模型；并將同一部位轉(zhuǎn)移灶體外建系，在裸鼠體內(nèi)多次傳代，得到卵巢癌細胞亞系(SKOV-3F<,3>、3AOF<,3>和W3AOF<,4>)。通過觀察不同卵巢癌細胞亞系(SKOV-3、SKOV-3F<,3>;3AO、3AOF<,3>和3AOF<,4>)的成瘤率、在裸鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)移情況(轉(zhuǎn)移范圍、瘤結(jié)節(jié)重量及腹水形成情況)，結(jié)合細胞生長曲線、細胞體外黏附實驗、人工基底膜侵襲實驗、細胞體外移動