大黃素對(duì)高糖環(huán)境下系膜細(xì)胞收縮功能的影響.pdf

1、目的：
　　 糖尿病腎病是糖尿病患者的主要死亡原因之一，早期以腎小球高濾過為主要特征，它的發(fā)病機(jī)制主要涉及到多個(gè)方面，系膜細(xì)胞的增殖及功能異常在糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。p38MAPK是細(xì)胞信號(hào)傳遞的交匯點(diǎn)或共同通路，并將胞外信號(hào)傳導(dǎo)到胞內(nèi)，介導(dǎo)多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，活化相應(yīng)的靶基因，產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。近年研究表明p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活一定程度上導(dǎo)致和加速了糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展。PPARγ是p38M

2、APK信號(hào)通路中已知的調(diào)節(jié)因子，它的活化可抑制p38MAPK的活性。大量研究證明大黃素具有抑制免疫、抗炎、抗組織細(xì)胞增生的作用，且大黃素的大部分作用是通過抑制p38的活性的活性實(shí)現(xiàn)的，最近研究顯示大黃素具有PPARγ激活效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)采用Western blot和實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)p38MAPK的活性和PPARγ表達(dá)水平，探討大黃素是否通過激活PPARγ來抑制p38MAPK的活性，進(jìn)而改善系膜細(xì)胞的收縮功能。
　　 方法：

3、r>　　 1.高糖環(huán)境的建立：分別采用正常糖DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基與高糖DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基，糖濃度5.6mmol/L為正常糖對(duì)照組、糖濃度為30mmol/L為高糖實(shí)驗(yàn)組。
　　 2.實(shí)驗(yàn)分組：培養(yǎng)系膜細(xì)胞，調(diào)整培養(yǎng)液為以下五組：正常糖組(糖濃度5.6mmol/L，NG組)、高糖組(糖濃度30mmol/L，HG組)、低濃度大黃素組(50mg/L大黃素+高糖，LE組)、高濃度大黃素組(100mg/L大黃素+高糖，HE組)和過氧化物酶體

4、增殖物活化受體γ(PPARγ)抑制劑GW9662組(10μ mol/L GW9662+高糖+高濃度大黃素，GW組)。
　　 3.系膜細(xì)胞收縮能力測(cè)定：血管緊張素Ⅱ刺激系膜細(xì)胞，倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞變化，系膜細(xì)胞收縮力以細(xì)胞收縮前后表面積的變化表示。
　　 4.p38蛋白、磷酸化p38蛋白及PPARγ蛋白的測(cè)定：采用Western blot檢測(cè)總p38蛋白、磷酸化p38蛋白及PPARγ蛋白的表達(dá)。
　　 5.PP

5、ARγ mRNA的測(cè)定：采用RT-PCR方法測(cè)定PPARγ mRNA。
　　 結(jié)果：
　　 1、高糖對(duì)系膜細(xì)胞收縮功能的影響及大黃素對(duì)該影響的作用：血管緊張素Ⅱ刺激正常糖組系膜細(xì)胞后，細(xì)胞表面積較刺激前降低了39％，而高糖組卻只降低了12％(P<0.05)，與高糖組比較，低濃度的大黃素組細(xì)胞表面積較前降低了22％(P<0.05)，而高濃度組細(xì)胞表面積降低了30％(P<0.05)，GW9662組細(xì)胞表面積較前只降低了20％

6、(P<0.05)。
　　 2、高糖環(huán)境下大黃素對(duì)總p38及磷酸化p38蛋白表達(dá)水平的影響：Westernblot測(cè)定發(fā)現(xiàn)高糖組磷酸化p38水平較正常糖組增加了280％(P<0.01)，而總p38兩組間沒有顯著差異。低濃度大黃素組和高濃度大黃素較高糖組，磷酸化p38水平分別下降了40％(P<0.05)和73％(P<0.01)，但總p38水平并無(wú)明顯差異，GW9662組較高濃度大黃素組，磷酸化p38蛋白水平升高了96％(P<0.05

7、)。
　　 3、大黃素對(duì)系膜區(qū)PPARγ的表達(dá)水平的影響：RT-PCR顯示，低濃度大黃素組和高濃度大黃素組較高糖組PPARγ mRNA水平分別升高了151％(P<0.05)和177％(P<0.01)。而Western blot顯示蛋白水平也分別升高了196％和421％(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、高糖組p38 MAPK的活性增加，系膜收縮功能明顯下降。
　　 2、大黃素組能明顯抑制p38MA