棲息地破碎化背景下黑頸長尾雉保護遺傳學研究.pdf

1、黑頸長尾雉（Syrmaticus humiae）屬于世界珍稀瀕危雉類，地理分布狹窄(。)僅分布在中國西南部、泰國北部、緬甸西北部和印度東北部。由于棲息地破碎化和人為捕獵，黑頸長尾雉種群分布范圍和種群數量不斷銳減，已被列為國家Ⅰ級保護動物，國際瀕危物種貿易公約(CITES)附錄Ⅰ，世界保護聯盟(IUCN)將其定為近危種(Near Threatened)。本文以分布在廣西-貴州兩省的南盤江和紅水河流域的6縣（隆林縣、西林縣、田林縣、樂業(yè)縣、

2、天峨縣和羅甸縣）的4個黑頸長尾雉地理種群為研究對象，綜合運用線粒體DNA和核DNA微衛(wèi)星為分子標記，檢測黑頸長尾雉的種群遺傳多樣性和種群遺傳結構，以期為針對該珍稀瀕危物種保護策略的制定提供科學依據。主要研究結果如下:
　　1、通過磁珠富集法構建了黑頸長尾雉微衛(wèi)星文庫，共篩選出12對具有多態(tài)性的微衛(wèi)星引物。利用這12對微衛(wèi)星引物對來自天峨縣的16個黑頸長尾雉個體樣品DNA進行PCR擴增并測序和分型。結果表明，12對引物擴增條帶均呈現

3、多態(tài)性，平均等位基因(Na)數目為9個(4～13)，平均觀察雜合度（Ho）和期望雜合度（He）分別為0.70(0.2～0.938)和0.81(0.303～0.925)。經進一步分析發(fā)現，有4個微衛(wèi)星位點（ShuI-35，ShuI-62，ShuI-51和ShuI-15）偏離哈迪-溫伯格平衡(P＜0.05)，但是沒有發(fā)現位點間的連鎖不平衡。這12個具有多態(tài)性微衛(wèi)星位點將對黑頸長尾雉的保護遺傳學或者長尾雉屬的其它物種種群遺傳學研究提供了很好的

4、分析標記工具。
　　2、線粒體DNA數據和微衛(wèi)星DNA（12對微衛(wèi)星引物擴增）數據分析表明，黑頸長尾雉的田林-隆林-西林種群(TLX)、樂業(yè)-下老種群(LX)、羅甸種群(LD)和坡結種群(PJ)均具有較高的遺傳多樣性。4個地理種群73個個體全部擴增成功，獲得73條黑頸長尾雉mtDNA D-loop基因全序列(1143bp)，檢測到58個變異位點，并定義了39個單倍型。各地理種群的單倍型多樣性（h）分別為0.812、0.926、0.

5、722和0.905;核苷酸多樣性（π）分別為0.00516、0.0075、0.00463和0.01;微衛(wèi)星DNA的種群雜合度期望值(HE)分別為0.75、0.77、0.79和0.81，觀察值雜合度（Ho）分別為0.73、0.77、0.83和0.72。
　　3、利用黑頸長尾雉線粒體DNA控制區(qū)序列以鄰接法(NJ)構建的系統(tǒng)發(fā)生樹和單倍型網絡關系圖顯示黑頸長尾雉4個種群的單倍型并沒有按照獨自的地理種群聚集在一起，而是互相混合分散的分布

6、在系統(tǒng)進化樹上，沒有表現出明顯的系統(tǒng)地理格局。微衛(wèi)星數據多元協(xié)調的主成分分析(principal coordinateanalysis，PCA)也顯示相同的結果，4個地理種群的73個體相互混合聚在一起，并形成出現獨立進化的地理種群單元。通過用STRUCTURE軟件對種群遺傳結構分析發(fā)現，種群間不存在聚類關系，種群之間沒有出現明顯的遺傳分化，說明了種群間個體交流頻繁。
　　3、對黑頸長尾雉種群的選擇中性檢測(neutrality t

7、est)進行分析，結果表明，各個種群的Tajima's D、Fu and Li's D、Fu and Li's F、Fu's Fs statistic等參數均不顯著，線粒體DNA中性檢測結果為Fu's Fs=-0.971(p＞0.05)和擬合優(yōu)度檢測結果SSD=0.78094(P＜0.01)，表明黑頸長尾雉種群歷史上并沒有發(fā)生過顯著的種群擴張?；谖⑿l(wèi)星數據，采用雜合子檢驗法(Wilcoxon's Test)及TPM突變模型檢測種群近期

8、動態(tài)及遺傳瓶頸效應，結果表明種群未經歷過近期的瓶頸效應，整個黑頸長尾雉種群處于一個穩(wěn)定狀態(tài)。
　　4、在種群遺傳分化檢測中，線粒體DNA序列數據分析(AMOVA)結果表明，遺傳分化主要來自于種群內部個體之間，達到了98.03％，而種群間的差異僅為1.97％，而微衛(wèi)星數據分析(AMOVA)結果與線粒體DNA序列分析結果相似，種群內部個體之間的差異達到97％之多，而種群間的差異僅為3％，其結果進一步說明了黑頸長尾雉的種群間基因交流非常

9、頻繁（表3-10和表3-17）。
　　另外，線粒體DNA和微衛(wèi)星DNA遺傳標記共同分析結果表明，323國道對TLX和LX兩個種群之間并沒有產生阻隔效應，南盤江、和紅水河在LX和LD、LX和PJ、TLX和LD種群之間均沒有形成天然的地理阻隔，南盤江和紅水河兩岸的種群基因交流頻繁。此外，本文所研究的黑頸長尾雉4個地理種群之間沒有遺傳分化，因此，建議把這4個地理種群當做一個管理單元進行保護管理。
　　5、問卷調查結果說明，民眾野生

10、動物保護意識薄弱以及大量的人為獵捕是導致黑頸長尾雉種群數量急劇減少的主要因素。為了有效遏制黑頸長尾雉種群數量不斷減少的趨勢，急需對黑頸長尾雉進行相應保護，主要措施為:(1)重視和加強偏遠山區(qū)民眾的野生動、植物保護科普和法律宣傳教育，提高廣大公眾的保護意識和法制觀念;(2)加強野生動物管理的監(jiān)督和執(zhí)法力度，對非法偷獵野生動物的不法分子給予堅決的查處，通過法律手段來震懾各種偷獵野生動物的不法分子;(3)加快偏遠山區(qū)的經濟建設和發(fā)展，盡早的讓