乳腺癌中TRPS1促血管生成并影響VEGFA表達的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景
　　新生血管是乳腺癌的惡性標志之一，乳腺癌的增殖和轉(zhuǎn)移依賴于血管新生。腫瘤細胞缺氧誘導(dǎo)周圍血管以出芽的方式新生新的血管，提供足夠的氧氣與養(yǎng)分，滿足腫瘤生長的需要，并促進腫瘤的轉(zhuǎn)移。血管生成的調(diào)節(jié)是一個復(fù)雜的過程，VEGFA在其中起重要作用。抗VEGF單抗及其他小分子藥物治療方法已經(jīng)應(yīng)用于腫瘤的臨床治療，但是這些藥物因其產(chǎn)生的副作用依然不能令人滿意。
　　TRPS1屬于GATA轉(zhuǎn)錄因子家族，其編碼基因突變導(dǎo)致鼻-指-

2、趾綜合征。許多研究報道TRPS1在乳腺及其他部位正常組織表達水平低，而乳腺癌中表達增高。TRPS1通過miR221/222調(diào)節(jié)ZEB2，從而誘導(dǎo)乳腺癌的上皮間葉轉(zhuǎn)化。在本研究中，我們將探討TRPS1與乳腺癌血管生成的關(guān)系以及其對VEGFA表達的影響。
　　研究方法
　　1、選取手術(shù)切除的女性乳腺癌組織117例，免疫組化的方法檢測TRPS1蛋白及CD31標記的微血管密度(MVD)的表達。
　　2、選取乳腺癌細胞系T47D

3、及MDA-MB-231，向低表達TRPS1的乳腺癌細胞系MDA-MB-231中轉(zhuǎn)染含TRPS1全長cDNA序列的載體，向高表達TRPS1的乳腺癌細胞系T47D轉(zhuǎn)染含TRPS1干擾序列的病毒載體，構(gòu)建T47D-TS，T47D-nc，231-TRPS1，及231-vector細胞系。
　　3、選取人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞系humanumbilicalveinendothelialcell(HUVEC)，采用HUVEC趨化作用實驗檢測TRP

4、S1蛋白表達對各乳腺癌細胞系誘導(dǎo)HUVEC遷移能力的影響。
　　3、分別用qPCR及Westernblot檢測各乳腺癌細胞系中VEGFAmRNA及蛋白水平的表達，并通過ELISA方法分析各細胞系培養(yǎng)基上清中VEGFA蛋白濃度。
　　4、分析VEGFA基因啟動子區(qū)，尋找TRPS1轉(zhuǎn)錄因子可能的結(jié)合位點，ChIP驗證。
　　實驗結(jié)果
　　1、乳腺癌組織中TRPS1蛋白與MVD呈正相關(guān)。TRPS1陽性乳腺癌標本中75％

5、MVD高表達，而TRPS1陰性標本中，僅有56.5％MVD高表達.TRPS1與乳腺癌MVD水平具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.001，R=0.313）
　　2、乳腺癌細胞系中TRPS1表達促進乳腺癌細胞誘導(dǎo)HUVCE遷移。231-TRPS1為實驗組，231-vector對照組，培養(yǎng)于實驗組細胞上清液的HUVEC遷移能力相對對照組有顯著提高（P＜0.0001）。在T47D細胞中沉默TRPS1導(dǎo)致乳腺癌細胞誘導(dǎo)HUVEC遷移能力減低（P＜0.

6、01）
　　3、乳腺癌細胞系中TRPS1表達促進乳腺癌細胞表達VEGFA。231-TRPS1中VEGFA表達在mRNA（P＜0.05）及蛋白水平（P＜0.05）高于231-vector細胞，細胞培養(yǎng)基上清中VEGFA含量也增高(P＜0.01)。T47D-TS中VEGFA表達在mRNA（P＜0.05）及蛋白水平（P＜0.01）低于T47D-nc細胞，細胞培養(yǎng)基上清中VEGFA含量也降低（P＜0.05）。
　　4、轉(zhuǎn)錄因子TRP