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1、單純皰疹病毒Ⅰ(HSV-1)是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的雙鏈DNA病毒,具有較強(qiáng)傳染性,在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制過(guò)程中與宿主細(xì)胞之間表現(xiàn)有多種相互作用。HSV-1與細(xì)胞的相互作用是研究HSV-1感染不同細(xì)胞后會(huì)形成不同的感染過(guò)程及結(jié)果的基礎(chǔ)。以這個(gè)角度來(lái)看,對(duì)于病毒蛋白及其細(xì)胞作用蛋白在病毒感染周期中的功能分析,在探索細(xì)胞對(duì)病毒感染產(chǎn)生相應(yīng)反應(yīng)的機(jī)理,和由此機(jī)理所導(dǎo)致的各種可能的生物學(xué)意義,以及由此確定的臨床治療或診斷方法等領(lǐng)域內(nèi)的應(yīng)用都具有很大的意義。
2、r> HSV-1VP26是核衣殼組成中最小的蛋白,其功能至今尚未闡明。本實(shí)驗(yàn)的研究重點(diǎn)是分析在病毒感染周期中病毒核衣殼蛋白VP26的功能及尋找與其相互作用的細(xì)胞蛋白。首先構(gòu)建了UL35-EGFP重組病毒,利用該重組病毒與野毒株的生長(zhǎng)曲線的差異分析,發(fā)現(xiàn)重組病毒出現(xiàn)了出胞膜阻滯的現(xiàn)象,提示VP26的功能可能與病毒感染周期中的出質(zhì)膜環(huán)節(jié)相關(guān)。隨后通過(guò)酵母雙雜交系統(tǒng)篩查到VP26和細(xì)胞膜上的蛋白——CMTP-7有相互作用,免疫共沉淀和雙
3、熒光細(xì)胞共定位分析驗(yàn)證了二者在完整細(xì)胞中存在生理性相互作用。隨后采用siRNA技術(shù)和實(shí)時(shí)定量PCR方法進(jìn)行了進(jìn)一步的研究,在敲除CMTP-7蛋白的細(xì)胞內(nèi),病毒復(fù)制裝配未受影響,但出現(xiàn)病毒出胞阻滯的現(xiàn)象,檢測(cè)病毒滴度發(fā)現(xiàn)病毒生長(zhǎng)量低于正常細(xì)胞內(nèi)的所得數(shù)量,運(yùn)用透射電鏡也觀察到了在近細(xì)胞膜的胞質(zhì)外圍處出現(xiàn)了堆積成團(tuán)的病毒。而流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn)在病毒出細(xì)胞時(shí)CMTP-7也隨之減少。這些結(jié)果表明CMTP-7的功能和HSV-1出質(zhì)膜這一過(guò)程相關(guān)。
4、HSV-1在CMTP-7蛋白敲除的細(xì)胞內(nèi)和UL35-EGFP重組病毒在正常細(xì)胞內(nèi)所表現(xiàn)出的特性極為相似。
以上結(jié)果強(qiáng)烈提示二者通過(guò)相互作用在完成同一項(xiàng)功能。即VP26具有與病毒包膜化和有效出胞膜的相關(guān)功能,并且是通過(guò)CMTP-7相互作用來(lái)完成這一對(duì)病毒感染周期至關(guān)重要的過(guò)程。而在熒光顯微鏡下還觀察到,CMTP-7可以隨病毒再次感染其它細(xì)胞。并且在新生病毒粒上檢測(cè)出了CMTP-7蛋白。這些結(jié)果似乎表明CMTP-7和VP26作
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