培哚普利對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注損傷早期保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：隨著介入治療的迅速發(fā)展，心肌缺血再灌注損傷成為人們研究的熱點(diǎn)之一。目前，缺血再灌注損傷發(fā)生的機(jī)制尚未完全闡明，氧自由基生成、血管內(nèi)皮損傷、鈣超載和白細(xì)胞激活已較為公認(rèn)，但并不能解釋全部現(xiàn)象。最近的研究顯示，心肌缺血再灌注損傷還與炎性因子產(chǎn)生、細(xì)胞凋亡、粘附分子表達(dá)及核轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控等機(jī)制有關(guān)。有研究顯示再灌注啟動(dòng)了一個(gè)典型的炎癥反應(yīng)，多形核中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)，已成為心肌缺血再灌注后的主要問(wèn)題。Toll樣受體4是新近發(fā)現(xiàn)的天然免疫中

2、的細(xì)胞跨膜受體及病原模式識(shí)別受體，其除了參與病原微生物觸發(fā)的炎癥反應(yīng)外，有研究提示TLR-4也參與了缺血組織損傷的炎癥反應(yīng)。在正常生理情況下，內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)組成型一氧化氮合酶持續(xù)合成少量一氧化氮，對(duì)維持正常的血管內(nèi)皮功能起重要作用。近年發(fā)現(xiàn)NO減少亦是PMN激活的一個(gè)重要因素，心肌缺血再灌注早期可導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，內(nèi)源性NO合成減少，抗PMN作用減弱，加重心肌缺血再灌注損傷。
　　 目的：培哚普利在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有抗心肌缺血再灌注損

3、傷作用，減輕心肌缺血再灌注損傷引起的心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變、心肌出血、心肌頓抑以及心律失常等，但其心肌保護(hù)作用的具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。
　　 本研究分兩部分，第一部分觀察培哚普利對(duì)缺血再灌注早期Toll樣受體4蛋白的影響，探討培哚普利對(duì)心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用與Toll樣受體4蛋白介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的關(guān)系；第二部分腹腔注射N(xiāo)O非選擇性阻斷劑(L-NAME)，觀察培哚普利對(duì)心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用與NO的關(guān)系，初步探討培哚普利對(duì)心肌

4、缺血再灌注損傷的可能保護(hù)機(jī)制。
　　 第一部分：
　　 方法：30只Wistar大鼠隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組，缺血再灌注組及培哚普利組。培哚普利組灌服培哚普利4mg/kg，每日1次，共7天。假手術(shù)組和缺血再灌注組分別灌服相應(yīng)體積的生理鹽水。采用大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎法建立大鼠缺血再灌注模型，缺血30分鐘，再灌注1小時(shí)。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取出心臟于4％多聚甲醛固定、石蠟包埋切片，HE染色觀察心肌病理形態(tài)學(xué)變化，按TUNEL法檢

5、測(cè)凋亡細(xì)胞，以S-P免疫組化法檢測(cè)TLR4蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：①與缺血再灌注組相比，培哚普利組炎癥損傷減輕；②培哚普利組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯低于缺血再灌注組但高于假手術(shù)組(P＜0.05)；③培哚普利組心肌組織Toll樣受體4蛋白平均積分光密度值低于缺血再灌注組但高于假手術(shù)組(P＜0.05)。
　　 第二部分：
　　 方法：40只Wistar大鼠隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組，缺血再灌注組，培哚普利組及聯(lián)合用藥組。假手

6、術(shù)組和缺血再灌注組灌服和腹腔注射等量的生理鹽水，假手術(shù)組只在左冠狀動(dòng)脈前降支下穿線(xiàn)，不結(jié)扎；培哚普利組灌服培哚普利4mg/kg，腹腔注射等量的生理鹽水；聯(lián)合用藥組灌服培哚普利4mg/kg，腹腔注射L-NAME15mg/kg；每日1次，共7天。結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支，建立大鼠缺血再灌注模型。測(cè)定血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓最大上升速率(+dP/dTmax)及左室內(nèi)壓最大下降速率(-dP/d

7、Tmax)。光鏡觀察心肌形態(tài)學(xué)改變，TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡指數(shù)。
　　 結(jié)果：①缺血前四組動(dòng)物L(fēng)VSP、LVEDP、+dP/dTmax、-dP/dTmax，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；假手術(shù)組在缺血30 min及再灌注30 min，60min時(shí)血流動(dòng)力學(xué)平穩(wěn)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；缺血30 min后與缺血前相比三組動(dòng)物L(fēng)VSP、+dP/dTmax及-dP/dTmax均明顯下降(P＜0.05)，但后三組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

8、(P＞0.05)；再灌注30 min，60min后缺血再灌注組及聯(lián)合用藥組LVSP+dP/dTmax及-dP/dTmax，相對(duì)穩(wěn)定，培哚普利組LVSP逐漸回升，與培哚普利組相比缺血再灌注組和聯(lián)合用藥組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。缺血30 min后三組動(dòng)物L(fēng)VEDP均明顯上升，與缺血前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，后三組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，再灌注30 min，60min后缺血再灌注組及聯(lián)合用藥組LVEDP無(wú)明顯變化，培哚

9、普利組略有下降與缺血再灌注組及聯(lián)合用藥組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(詳見(jiàn)表2-2)。②假手術(shù)組散在心肌纖維腫脹、變性，間質(zhì)輕度水腫。缺血再灌注組及聯(lián)合用藥組大鼠心肌纖維斷裂壞死，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，而培哚普利組出血、壞死損傷輕微，有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。③與缺血再灌注組及聯(lián)合用藥組相比，培哚普利可減輕心肌細(xì)胞凋亡數(shù)(P＜0.05)，培哚普利組及聯(lián)合用藥組凋亡細(xì)胞數(shù)也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，均明顯高于假手術(shù)組(P＜0.05)。