貴州白山羊TFAM和TFB2M基因表達(dá)、多態(tài)對肉質(zhì)、屠宰性狀的影響研究.pdf

1、本研究以貴州白山羊?yàn)檠芯繉ο螅捎肞CR-SSCP、DNA直接測序、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、克隆等方法克隆得到TFAM基因的cDNA序列并利用生物信息學(xué)分析TFAM蛋白的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)等內(nèi)容，同時(shí)探索了TFAM和TFB2M基因的mRNA表達(dá)規(guī)律和多態(tài)性對貴州白山羊肉質(zhì)性狀和屠宰性能的影響，為開展貴州白山羊肉質(zhì)、屠宰性能的候選基因相關(guān)研究，提高地方山羊羊肉品質(zhì)，加快品種選育提供依據(jù)。試驗(yàn)獲得如下主要成果：
　　1.首次得到的貴州白山羊T

2、FAM基因的cDNA序列，通過生物信息學(xué)軟件分析TFAM蛋白的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)。TFAM蛋白ORF長741 bp，編碼246個(gè)氨基酸。其理論等電點(diǎn)PI為9.74表明TFAM是酸性的，同時(shí)，TFAM蛋白氨基酸序列不存在跨膜螺旋結(jié)構(gòu)不屬于膜蛋白或分泌蛋白。TFAM蛋白功能分析表明 TFAM蛋白在細(xì)胞被膜發(fā)揮功能的可能性最大，數(shù)值為13.18；基因本體分類表明，其可能發(fā)揮類似激素作用的概率數(shù)值為17.538。貴州白山羊和綿羊的氨基酸序列同源性為

3、98.8％。
　　2.試驗(yàn)篩選到TFB2M基因兩個(gè)SNPs位點(diǎn)，分別是C-429T和A17110C，兩個(gè)位點(diǎn)分別出現(xiàn)三種基因型CC、CT和TT，AA、AC和CC。群體遺傳變異分析表明兩個(gè)位點(diǎn)雜合度均較高，多態(tài)信息含量均表現(xiàn)為中度多態(tài)（0.25

4、CT基因型個(gè)體系水力顯著高于 TT基因型個(gè)體（P<0.05）；TT基因型個(gè)體骨重顯著大于CT基因型個(gè)體（P<0.05），暗示該SNPs位點(diǎn)可能對貴州白山羊的肉質(zhì)及骨重有影響。A17110C位點(diǎn)關(guān)聯(lián)分析結(jié)果顯示，AA基因型個(gè)體骨重顯著大于 AC基因型個(gè)體（P<0.05）。除此之外，其余肉質(zhì)性狀指標(biāo)及屠宰性狀指標(biāo)均差異不顯著，暗示該 SNPs位點(diǎn)可能對貴州白山羊骨重有影響。
　　3. C-429T和A17110C的單體型分析表明，AA

5、CC、CACC和CACT單體型在提高系水力，CACT單體型在提高剪切力，AACC和CATT單體型在提高骨重，AACT、CACC和CACT單體型在提高肉骨比，AACC單體型在提高骨率方面可能發(fā)揮調(diào)控作用。
　　4.肉質(zhì)性能指標(biāo)間相關(guān)分析表明，失水率與熟肉率和大理石紋均為極顯著正相關(guān)（P<0.01）。剪切力和系水力，大理石紋和系水力、熟肉率間呈顯著正相關(guān)（P<0.05）。屠宰性能指標(biāo)間進(jìn)行相關(guān)分析表明，活重與胴體重、凈肉重、皮毛重、腰

6、部肌肉厚極顯著正相關(guān)（P<0.01），與骨重顯著正相關(guān)（P<0.05），與皮率顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05）。屠宰率與凈肉重、腰部肌肉厚、凈肉率、骨率、骨肉比極顯著正相關(guān)（P<0.01），與骨重顯著相關(guān)（P<0.05），與皮率極顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05）。胴體重與屠宰率、凈肉重、骨重、皮毛重、腰部肌肉厚、凈肉率、骨肉比極顯著正相關(guān)（P<0.01），與骨率、骨肉比顯著正相關(guān)（P<0.05），與皮率極顯著負(fù)相關(guān)（P<0.01）。
　　5.

7、 TFB2M基因生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示，A17110C位點(diǎn)處堿基變異致使其二級結(jié)構(gòu)略微發(fā)生變化，最小自由能由-529.4 kJ/mol減少到-529.8 kJ/mol，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性略有增加。C-429T位于TFB2M基因的啟動子區(qū)，預(yù)測發(fā)現(xiàn)存在2個(gè)可能的核心啟動子區(qū)域。該SNPs位點(diǎn)使轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)變化較大。同時(shí)，C-429T位點(diǎn)處于各軟件預(yù)測的CpG島區(qū)，但該位點(diǎn)對CPG島的影響不大。
　　6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測TFAM基因

8、和TFB2M基因在貴州白山羊各組織中的表達(dá)量。發(fā)現(xiàn)其表達(dá)規(guī)律分別是肺＞小腦＞垂體＞心＞下丘腦＞腎＞大腦＞肝＞脾；脾＞腎＞肺＞垂體＞大腦＞心＞小腦＞下丘腦＞肝。
　　7. TFAM基因在腎組織、下丘腦、肺、大腦中的表達(dá)量分別與失水率、剪切力、胴體重、肉骨比呈顯著正相關(guān)（P<0.05），在垂體、肝臟中的表達(dá)量與系水力、骨重呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05）。TFB2M基因在肺、脾、腎、垂體、肝臟、脾臟中的表達(dá)量與剪切力、失水率、肉色、大理石