西洋參中抗糖尿病物質(zhì)的研究.pdf

1、糖尿病目前已成為許多國(guó)家的常見病和多發(fā)病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，世界上每年新增3～5％糖尿病患者，其中90％以上是2型糖尿病，我國(guó)糖尿病的發(fā)病率約為3.21％。世界衛(wèi)生組織和國(guó)際糖尿病聯(lián)合會(huì)將每年的11月14定為“世界糖尿病日”。目前糖尿病的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)，尤其在發(fā)展中國(guó)家增加的速度更快，其死亡率僅次于心腦血管疾病、癌癥，被認(rèn)為是人類第三大殺手，在世界各國(guó)都成為令人關(guān)注的社會(huì)公共衛(wèi)生問(wèn)題。因此，積極預(yù)防和治療糖尿病已迫在眉睫。

2、近年來(lái)，中西結(jié)合治療糖尿病愈來(lái)愈被廣大醫(yī)藥工作者重視，天然抗糖尿病藥用植物的開發(fā)也變得尤為重要，深入挖掘治療糖尿病的中草藥資源已成為新藥開發(fā)的熱點(diǎn)。西洋參多年來(lái)一直被中醫(yī)用作治療多種虛弱病癥，而且有關(guān)研究也表明，西洋參具有抗糖尿病的作用，并已應(yīng)用于臨床。本實(shí)驗(yàn)對(duì)西洋參中抗糖尿病物質(zhì)進(jìn)行了研究。一些醫(yī)學(xué)專家經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期臨床實(shí)踐觀察，證明含有西洋參的復(fù)方制劑對(duì)2型糖尿病有緩解癥狀、降低血糖和尿糖、控制其發(fā)展的作用。但是對(duì)西洋參中抗糖尿病物質(zhì)的研

3、究，目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在揭示西洋參抗糖尿病的活性物質(zhì)，為研究西洋參的抗糖尿病作用奠定基礎(chǔ)。 日本學(xué)者曾報(bào)道過(guò)人參水提液可降低血糖，人參中的焦谷氨酸具有胰島素樣作用。西洋參能在臨床上用于治療糖尿病，作者經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，西洋參中含有焦谷氨酸。本實(shí)驗(yàn)對(duì)西洋參焦谷氨酸的提取溶劑進(jìn)行了探討。篩選提取溶劑實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：100％甲醇、無(wú)水乙醇和50％乙醇三種溶劑浸提，所得焦谷氨酸的浸出率無(wú)顯著差異，因此，采用50％乙醇為提取溶劑

4、。具體方法：依次用實(shí)驗(yàn)材料8倍、6倍、4倍體積的50％乙醇浸泡24h后，超聲提取40min，功率為200W，頻率為40kHz，合并提取液，濃縮得到含有焦谷氨酸的提取物。這種溶媒為50％乙醇的超聲提取焦谷氨酸的方法，操作簡(jiǎn)單，溶劑成本低，提取徹底，所以是一種既簡(jiǎn)單快捷，又經(jīng)濟(jì)易行的方法。 實(shí)驗(yàn)篩選出了從西洋參中分離焦谷氨酸的方法。提取液濃縮至一定體積，用10倍量(v/v)的100％甲醇處理，除去沉淀，甲醇液濃縮過(guò)D101大孔樹脂柱

5、層析，蒸餾水洗脫組分，上SephadexLH-20柱層析，50％乙醇洗脫，經(jīng)薄層層析檢測(cè)，將含有焦谷氨酸的組分再經(jīng)硅膠干柱二次層析，洗脫溶劑依次為CHCl3：MeOH(9：1)和n-BuOH：AcOH：H2o(3：1：1)，得到焦谷氨酸。 采用HPLC方法測(cè)定焦谷氨酸的含量報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)摸索出了利用高效液相測(cè)定焦谷氨酸含量的色譜條件。采用Agilent高效液相色譜儀，德國(guó)NucleosilC18(5μm，150mm×4.6mm

6、ID)色譜柱，在柱溫：35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；流速：0.4mL/min；流動(dòng)相：甲醇-醋酸鈉緩沖溶液(0.005NNaAc)二元洗脫(A：甲醇；B：0.005N醋酸鈉緩沖溶液；A：B=8：92)條件下測(cè)定了西洋參中的焦谷氨酸含量。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算其回歸方程為：Y=69498.75x-183.3607，r=0.99924，在0.05～0.30mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；平均回收率(n=6)為99.09％，RSD=2.354％；通過(guò)

7、對(duì)此HPLC測(cè)定焦谷氨酸含量方法進(jìn)行考察，表明該法簡(jiǎn)便、靈敏和準(zhǔn)確，可作為評(píng)定焦谷氨酸含量的有效分析方法。 本研究對(duì)西洋參不同部位焦谷氨酸的含量進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明：西洋參莖葉中焦谷氨酸的含量為0.0401％；根中為0.2248％；果中0.3427％。由此可見，西洋參果中的焦谷氨酸含量最高，其次為根，三者中含量較低的是莖葉。 據(jù)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)道，某些人參皂苷具有治療糖尿病的作用，能提高血清中的胰島素水平，故本實(shí)驗(yàn)對(duì)西洋參中

8、有一定抗糖尿病作用的人參皂苷Re、Rb1、Rb2含量進(jìn)行了測(cè)定。其結(jié)果為果中Re、Rb1、Rb2分別0.8929％、0.5013％、0.3233％，三種皂苷總含量為1.7157％；根中Re、Rb1、Rb2分別為0.8487％、0.9796％、0.3635％，三種皂苷總含量為2.1918％；莖葉中Re、Rb1、Rb2分別為0.6190％、0.4049％、0.2232％，三種皂苷總含量為1.2479％。 實(shí)驗(yàn)中單體皂苷含量測(cè)定的某些

9、結(jié)果與參考文獻(xiàn)報(bào)道的有所不同，其原因可能是多方面的，品種、樣品生長(zhǎng)年限、樣品生長(zhǎng)環(huán)境、栽培條件、取樣時(shí)間、取樣部位、對(duì)樣品處理的方法以及測(cè)定方法的差異都有可能影響測(cè)定結(jié)果。 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道：無(wú)論有無(wú)胰島素存在，焦谷氨酸都能顯著地抑制腎上腺素誘導(dǎo)的脂肪分解，同時(shí)也能促進(jìn)葡萄糖合成脂肪。因此，焦谷氨酸可謂胰島素樣物質(zhì)。作者從西洋參中發(fā)現(xiàn)了焦谷氨酸，這為西洋參在臨床上應(yīng)用治療糖尿病提供了一定的理論依據(jù)。人參單體皂苷藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：西洋

10、參單體皂苷Re、Rb1、Rb2、Rc、Rc和Rd對(duì)α-蔗糖酶未見有明顯的作用，對(duì)麥芽糖酶未見有顯著的抑制作用。人參單體皂苷Re對(duì)α-淀粉酶具有一定的抑制作用，隨著人參單體皂苷Re濃度的增加，其對(duì)α-淀粉酶活性的抑制作用也隨之增強(qiáng)，當(dāng)濃度為5mg/mL時(shí)，對(duì)α-淀粉酶活性的抑制率為45.4％。人參皂苷Re對(duì)鏈脲霉素高血糖大鼠有降血糖作用；對(duì)大鼠葡萄糖負(fù)荷后血糖的上升有抑制作用。這一研究結(jié)果為評(píng)價(jià)西洋參的藥用功能、臨床藥效提供了一定的理論指

11、導(dǎo)。本文的創(chuàng)新點(diǎn)： 1.從西洋參根及果中得到了一個(gè)該植物中新發(fā)現(xiàn)的具有胰島素樣物質(zhì)的化合物，通過(guò)物理常數(shù)、碳譜(13CNMR)、氫譜(1HNMR)、紅外光譜(IR)、紫外光譜(UR)、質(zhì)譜(MS)及DEPT譜的波譜分析，確定該化合物為焦谷氨酸。 2.確立了高效液相測(cè)定西洋參中焦谷氨酸含量的色譜條件。首次采用HPLC方法對(duì)西洋參中焦谷氨酸的含量進(jìn)行了測(cè)定，并對(duì)該測(cè)定方法進(jìn)行了方法學(xué)考察，證明該法簡(jiǎn)便，靈敏和準(zhǔn)確，可作為評(píng)定