非諾貝特保護非酒精性脂肪性肝病小鼠肝臟損傷機制的初步探討.pdf

1、目的：觀察高熱量高膽固醇飲食(high-calorie and high-cholesterol diet,HCD)對C57BL/6小鼠肝臟的影響,初步探討非諾貝特(fenofibrate)對非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)小鼠肝臟損傷的保護作用機制。
　　方法：將C57BL/6小鼠隨機分為正常飲食(SCD)組、高熱量高膽固醇飲食(HCD)組和非諾貝特治療(HCF

2、)組。用高熱量高膽固醇飲食喂養(yǎng)3月,建立非酒精性脂肪性肝病小鼠模型,3月后,用非諾貝特(40mg/kg/d)治療4周。葡萄糖耐量試驗(GTT)和胰島素耐量試驗(ITT)測定胰島素敏感性,檢測TG、TC、LDL-C、HDL-C、ALT、AST等血清生化指標以及TNF-α、IL-6、MCP-1等炎性指標水平,HE、油紅及 Masson染色觀察肝臟組織的病理學變化,制備10％肝組織勻漿測定MDA、GSH-Px、T-AOC和SOD等氧化應(yīng)激指標

3、及TG含量情況,免疫組化檢測肝臟組織中TNF-α、CD68炎性分子表達,TUNEL法檢測小鼠肝細胞的原位凋亡,Real-time RT-PCR和RT-PCR測定肝組織PPARα、SREBP1-c、PTP1B、IRE-α、CHOP和GRP78 mRNA表達,Western-blot檢測肝組織GRP78、JNK、ERK蛋白表達量。
　　結(jié)果：①GTT試驗和ITT試驗表明,HCD組小鼠胰島素敏感性降低,存在胰島素抵抗,而非諾貝特治療后能

4、夠增加胰島素敏感性,改善胰島素抵抗。②與SCD組小鼠相比,HCD組小鼠血清TG、TC、LDL-C水平顯著升高,HDL-C水平明顯下降(P<0.01或P<0.05)。非諾貝特治療后能夠顯著降低血清TG水平(P<0.05)。③HCD組小鼠肝細胞內(nèi)可見脂滴形成,氣球樣變的肝細胞及炎性細胞浸潤,但尚未進展至纖維化階段,而HCF組肝臟脂肪變性程度及浸潤的炎細胞明顯減少。④HCD組小鼠血清 TNF-α、MCP-1等促炎因子明顯升高,而 IL-6等抗

5、炎因子降低(P<0.05),HCF組小鼠血清促炎因子MCP-1明顯降低(P<0.05)。免疫組化結(jié)果表明,與SCD組相比,HCD組小鼠肝臟TNF-α和CD68的表達量均增加。非諾貝特治療后能夠降低炎性分子表達量,減輕炎癥反應(yīng)。⑤TUNEL結(jié)果顯示 HCD組小鼠肝細胞出現(xiàn)明顯凋亡,而HCF組小鼠體內(nèi)發(fā)生凋亡的肝細胞明顯減少。⑥與SCD組相比,HCD組小鼠肝組織內(nèi)MDA明顯增加,T-SOD和GSH-Px明顯降低(P<0.05)。與HCD組相

6、比,HCF組小鼠肝組織內(nèi)T-SOD、T-AOC明顯增加,MDA明顯降低(P<0.05)。⑦HCD組小鼠肝組織內(nèi)SREBP-1c、PTP1B、IRE-α、XBP-1s和CHOP mRNA的表達增加,而PPARα、GRP78 mRNA的表達降低,非諾貝特治療后能降低 PTP1B、IRE-α、XBP-1s和CHOP mRNA的表達量,增加PPARα、GRP78 mRNA的表達量;此外,HCD組小鼠肝組織內(nèi)GRP78、JNK蛋白表達量明顯降低,