柳葉蠟梅成分測(cè)定及降血脂藥效探討.pdf

1、目的：
　?、俳C測(cè)定柳葉蠟梅(LYLM)揮發(fā)油中桉油精含量、HPLC測(cè)定槲皮素和山奈酚含量的方法，考察總黃酮和總多糖的提取工藝，同時(shí)測(cè)定鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂肪、水分和灰分含量，為柳葉蠟梅成分分析和質(zhì)量控制提供參考。
　?、谟矛F(xiàn)代中藥藥理學(xué)研究技術(shù)揭示民間柳葉蠟梅用于降血脂的科學(xué)內(nèi)涵。
　　方法：
　?、偬崛]發(fā)油，利用GC測(cè)定不同儲(chǔ)存時(shí)間的揮發(fā)油及其中桉油精含量;
　?、诳疾炜傸S酮的最佳提取工藝，三氯化鋁

2、顯色法測(cè)定含量;
　?、劭疾扉纹に睾蜕侥畏拥淖罴烟崛」に嚕瑧?yīng)用HPLC測(cè)其含量;
　?、芸疾炜偠嗵堑淖罴烟崛」に嚕椒?濃硫酸法測(cè)含量;
　?、輿]食子酸法測(cè)鞣質(zhì)含量、凱氏定氮法測(cè)蛋白質(zhì)含量、索氏抽提法測(cè)游離脂肪含量、酸水解法測(cè)總脂肪含量;
　?、拚麴s法測(cè)定水分含量、灼燒法測(cè)灰分含量;
　　⑦柳葉蠟梅對(duì)蛋黃乳劑致高脂血癥小鼠血脂水平的影響:預(yù)防性給藥8天后，蛋黃乳劑急性造模，摘眼球取血，依法檢測(cè)血清總膽固醇(

3、TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。
　?、嗔~蠟梅對(duì)高脂飼料致高脂血癥大鼠血脂水平的影響:采用高脂飼料連續(xù)飼養(yǎng)15天，建立高脂血癥SD大鼠模型。造模成功后，灌胃給予柳葉臘梅提取物，連續(xù)60天。眼眶取血，定期（第15、45天）檢測(cè)血清血脂四項(xiàng)水平，最后測(cè)定血流變指標(biāo)。
　　結(jié)果：
　?、俅鎯?chǔ)0、4、12個(gè)月的揮發(fā)油含量分別為2.30、2.00、1.75mL/

4、100g; GC方法學(xué)考察的精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性，RSD均小于2.0％，平均回收率99.50％(RSD1.7％);隨著保存時(shí)間的推移，揮發(fā)油中桉油精含量由54.30％升至62％左右。
　?、诳傸S酮的最佳提取工藝為:冷凝加熱回流提取;溶劑乙醇濃度50％;提取1.5h;固液比1∶10;提取2次測(cè)得含量為2.6％;
　?、坶纹に睾蜕侥畏拥淖罴烟崛」に嚍?不脫色;甲醇∶25％鹽酸（溶劑）=3∶1;固液比1∶25;提取50min;

5、HPLC方法學(xué)考察精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性，RSD均小于4.0％，槲皮素和山奈酚平均加樣回收率分別為97.81％(RSD3.29％)、90.01％(RSD2.38％);測(cè)得槲皮素和山奈酚平均含量分別為0.118％、0.147％;
　?、芸偠嗵堑淖罴烟崛」に嚍?提取2h;醇沉濃度90％;固液比1∶25;提取3次測(cè)得含量為5.08％;
　?、蓣焚|(zhì)含量0.563g/100g，蛋白質(zhì)含量9.34g/100g，游離脂肪含量2.45g/1

6、00g，總脂肪含量7.095g/100g;
　?、薇４?個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月的藥材水分含量分別為:9.0、9.5、10.6mL/100g，灰分含量分別為:8.082、8.026、8.216g/100g;
　?、吡~蠟梅對(duì)蛋黃乳劑致高脂血癥小鼠血脂水平的影響:與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠的血清TC、TG、LDL-c水平及LDL-c/HDL-c、TC/HDL-c比值均顯著升高(P＜0.01)，且HDL-c顯著降低(P＜0.

7、05);與模型對(duì)照組比較，LYLM各給藥組血清TC、TG、LDL-c水平及LDL-c/HDL-c、TC/HDL-c比值均降低或有降低趨勢(shì)，尤其是三個(gè)劑量組血清TC和TC/HDL-c比值均顯著降低(P＜0.05或P＜0.01)。柳葉蠟梅0.5g/kg、4g/kg劑量的降脂效果較2g/kg劑量為好。
　　⑧柳葉蠟梅對(duì)高脂飼料致高脂血癥大鼠血脂水平的影響:與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠的血清TC、TG、LDL-c水平和全血粘度30/s

8、、全血粘度3/s、卡松粘度和紅細(xì)胞壓積均顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)，血漿粘度有升高趨勢(shì);與模型對(duì)照組比較，給藥15天后LYLM0.5g/kg劑量組大鼠的血清TG水平顯著下降(P＜0.05)，給藥45天后LYLM0.5g/kg、4g/kg劑量組大鼠的血清TC、TG、LDL-c水平下降明顯(P＜0.05或P＜0.01)，給藥60天后LYLM4g/kg劑量組大鼠全血粘度200/s、30/s、3/s、紅細(xì)胞壓積均顯著下降(P＜0.0

9、1)，LYLM各劑量組大鼠血液的血漿粘度、紅細(xì)胞壓積和卡松粘度有不同程度的下降(P＜0.05或P＜0.01)，其中0.5g/kg和4g/kg劑量組的差異較顯著。
　　結(jié)論：
　?、儋A存時(shí)間對(duì)柳葉蠟梅揮發(fā)油及其中桉油精、水分、灰分含量均具有一定影響，優(yōu)化后的總黃酮、總多糖、槲皮素和山奈酚含量測(cè)定方法簡(jiǎn)單高效，建立的GC測(cè)定桉油精含量、HPLC測(cè)定槲皮素和山奈酚含量方法準(zhǔn)確可靠、專屬性強(qiáng)，可為柳葉蠟梅成分分析和質(zhì)量控制提供參考。