重組病毒在敏感性煙草上引發(fā)的過(guò)敏性反應(yīng)的研究.pdf

1、煙草花葉病毒(tobacco mosaic virus，TMV)是一種桿狀的正義RNA病毒。野生型TMV可以系統(tǒng)地感染敏感煙草N.tabacm cv. Samsun nn并產(chǎn)生典型的花葉癥狀。然而，TMV外殼蛋白(coat protein，CP)末端融合外源小肽所構(gòu)建的許多重組病毒中，如TMVFN20、TMVSc1754等能在Samsun nn的接種葉上引發(fā)類(lèi)似于抗性煙草上的枯斑反應(yīng)。 本實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)證明TMVFN20在敏感煙

2、草上引發(fā)的枯斑反應(yīng)是過(guò)敏性反應(yīng)(Hypersensitlve response，HR)，表明了TMVFN20能夠激活過(guò)敏性煙草的防衛(wèi)性反應(yīng)。同時(shí)也證明了HR的產(chǎn)生是重組CP在蛋白水平上引起的。為了尋找與重組CP蛋白相互作用的宿主蛋白，進(jìn)而闡明敏感煙草上HR的誘發(fā)機(jī)制，本工作通過(guò)酵母雙雜交方法用TMVFN20的外殼蛋白FN20CP作為誘餌從煙草酵母雙雜交cDNA文庫(kù)篩選與重組CP互作的蛋白因子，結(jié)果篩選得到三類(lèi)陽(yáng)性克隆，分別是煙草核糖體蛋

3、白小亞基S29(Nicotiana tabacum Ribosomal Protein S29，NTRps29)、內(nèi)幾丁質(zhì)酶(endochitinase)和碳酸酐酶（Carbonic Anhydrase，CA）。為了進(jìn)一步對(duì)候選蛋白因子進(jìn)行深入研究，原核表達(dá)并得到了NTRps29和endochitinase的融合蛋白，免疫家兔制備了NTRps29和endochitinase的多克隆抗體。與病原物激發(fā)子互作的蛋白因子的獲得以及對(duì)這些蛋白因

4、子的進(jìn)一步研究對(duì)闡述敏感性煙草上的這種非特異性的HR反應(yīng)機(jī)制非常關(guān)鍵。 與TMVFN20不同，TMVSc1754是融合有含跨膜區(qū)小肽的重組病毒，而且與TMVFN20在敏感煙草上引發(fā)的枯斑在表型上有差異，因此我們又以TMVSc1754為例來(lái)研究重組病毒在敏感煙草上引發(fā)的枯斑反應(yīng)。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示當(dāng)TMVSc1754侵染敏感煙草Samsun nn時(shí)，防衛(wèi)反應(yīng)相關(guān)基因，如HIN1和HRS203J，以及PR1a和PR1b等的表達(dá)強(qiáng)烈上調(diào)

5、，也證明了精胺(Spermine，Spm)信號(hào)通路參與了TMVSc1754誘導(dǎo)的敏感煙草上的枯斑反應(yīng)。本部分工作首先通過(guò)枯斑組織代謝物的檢測(cè)，說(shuō)明了TMVSc1754引發(fā)的這種枯斑與抗性煙草上的HR枯斑類(lèi)似，進(jìn)一步說(shuō)明TMVSc1754引發(fā)的敏感煙草上的枯斑反應(yīng)是HR。 其次，TMVSc1754侵染敏感煙草時(shí)，Spm合成途徑的關(guān)鍵酶ODC和SAMDC的表達(dá)強(qiáng)烈上調(diào)說(shuō)明在TMVSc1754誘發(fā)HR枯斑過(guò)程中，Spm在體內(nèi)大量積累，