大鼠二氧化碳氣腹后胃粘膜再灌注損傷及異丙酚的保護作用.pdf

1、目的： 觀察大鼠二氧化碳氣腹后引起的胃粘膜再灌注損傷并探討異丙酚對胃粘膜缺血再灌注損傷的保護作用。 材料和方法： 一、實驗動物 成年雄性Wistar大鼠(由中國醫(yī)科大學盛京醫(yī)院實驗動物部提供)280～320克左右，實驗前禁食24小時，自由飲水。實驗前進行1星期的適應(yīng)性喂養(yǎng)。 二、動物分組 24只隨機分成4組，每組6只。 A組：對照組，尾靜脈泵注生理鹽水(10ml/kg/h)1h，同

2、時保持0氣腹壓。 B組：缺血組，在A組基礎(chǔ)上給予20mmHg氣腹壓力1h。 C組：再灌注組，處置同B組，氣腹1h后，保持無氣腹壓0.5h。 D組：保護組，20mmHg氣腹1h，無氣腹0.5h，整個過程中尾靜脈泵注1mg/ml的異丙酚10ml/kg/h(異丙酚原液用生理鹽水做10倍稀釋而成)。 三、實驗方法 10％水合氯醛(3 ml/kg體重)腹腔注射麻醉。然后將動物固定于手術(shù)臺，尾靜脈穿刺，以備泵

3、注異丙酚或生理鹽水。腹部酒精消毒，于臍上將氣腹針插入腹腔內(nèi)。A組不向腹腔內(nèi)充入CO2，保持O氣腹壓1h；B、C、D組充入CO2，并使氣腹壓力維持在20mmHg。A、B、C組均泵注生理鹽水10ml/kg/h；D組泵注異丙酚10mg/kg/h，異丙酚原液(10mg/ml)用生理鹽水做10倍稀釋。C，D組在氣腹1h后，停止氣腹，保持0氣腹壓0.5h，每組泵注液體種類及時間，以及氣腹壓力、氣腹時間和氣腹后時間見表1。 四、觀察指標及生化

4、檢測 1、形態(tài)學指標 (1)胃粘膜光鏡：實驗結(jié)束時開腹，迅速游離全胃，沿大彎部剖開，冷生理鹽水漂洗內(nèi)容物，在腺胃區(qū)中部病變明顯部位取2×3mm胃粘膜用10％甲醛固定24-48h，待做光鏡標本，常規(guī)石蠟包埋，行4um切片，HE染色。 (2)胃粘膜透射電鏡：胃粘膜標本獲得方式同(1)，取1×0.5mm胃粘膜置于2.5％的戊二醛雙蒸水固定液中，4℃冰箱保存，待做電鏡標本。 2、生化學指標 (1)超氧化物

5、歧化酶SOD：胃粘膜標本置于液氮中迅速冷凍備用。統(tǒng)一稱重后置4℃生理鹽水中，制備為10％勻漿，4℃、100000r/min離心15min，分離上清液，-80℃保存。用黃嘌呤氧化酶法測定。通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基，后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下呈現(xiàn)紫紅色，用比色測定其吸光度，結(jié)果以亞硝酸鹽單位表示。 (2)丙二醛(MDA)：標本制備同上。用硫代巴比妥酸比色法測定。利用過氧化脂質(zhì)主要降解產(chǎn)物丙

6、二醛在酸性條件下兩分子硫代巴比妥縮合生成紅色物質(zhì)，于532nm比色測定。 (3)一氧化氮(NO)：標本制備同上。用硝酸還原酶法測定。NO化學性質(zhì)活潑，在體內(nèi)代謝很快轉(zhuǎn)為NO2-和NO3-，而NO2-又進一步轉(zhuǎn)化為NO3-，利用硝酸還原酶特異性將NO3-還原為NO2-，通過顯色深淺測定其濃度的高低。 (4)谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)：標本制備同上。GSH-PX可以促進過氧化氫與還原型谷胱甘肽反應(yīng)生成水及氧化型谷胱甘

7、肽，GSH-PX的活力可用其酶促反應(yīng)的速度來表示，測定此酶促反應(yīng)中還原型谷胱甘肽的消耗，則可求出酶的活力。 各指標的檢測均按試劑盒使用說明操作進行。 五、統(tǒng)計分析 用使SPSS13.0軟件系統(tǒng)進行統(tǒng)計學處理，計量資料以均數(shù)±標準差表示。采用t檢驗分析。P<0.05認為差別具有顯著性意義。 實驗結(jié)果： 一、各組光鏡結(jié)果比較A組：正常胃粘膜組織。 B組：粘膜下層少量炎細胞浸潤，胃粘膜表面有些輕

8、度糜爛。 C組：胃粘膜凹陷，形成淺潰瘍，粘膜下層炎細胞浸潤。 D組：炎細胞浸潤減少，胃粘膜表面比較平整光滑，接近正常胃粘膜組織。 二、各組透射電鏡結(jié)果比較 A組：壁細胞內(nèi)大量的細胞內(nèi)小管及正常線粒體，核膜光滑。 主細胞內(nèi)大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及一些正常結(jié)構(gòu)線粒體。 B組：壁細胞胞質(zhì)內(nèi)少數(shù)線粒體有絮狀改變，細胞核核型不規(guī)則，微管泡系統(tǒng)有所減少。 主細胞核形不規(guī)則，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，線粒體水腫，

9、基質(zhì)密度下降，外形模糊，內(nèi)有絮狀物改變。 C組：壁細胞核形不規(guī)則，異染色質(zhì)邊集，微管泡減少，胞質(zhì)內(nèi)見有髓鞘樣結(jié)構(gòu)，線粒體外膜破損，核膜腫脹。 主細胞：核膜腫脹，異染色質(zhì)邊集，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)過度擴張。 D組：壁細胞微管泡系統(tǒng)開始增多。 主細胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹相對減輕。 三、生化指標 再灌注組MDA升高，SOD，NO，GSH-PX降低，與其它各組相比均有統(tǒng)計學意義。異丙酚組與再灌注組相比，MDA降低