局部溫熱療法治療孢子絲菌病模型小鼠療效觀察及溫熱對皮損內(nèi)IFN-γ表達的影響.pdf

1、局部溫熱療法是孢子絲菌病的治療方法之一。目前認為，該方法的機制是其直接作用于病原菌，同時影響機體的免疫功能。本研究通過動物實驗觀察溫熱療法的療效并通過免疫組化的方法研究溫熱治療后皮損內(nèi)細胞因子的變化。從機體局部細胞免疫功能變化的角度探討熱療的作用機制。 實驗材料和方法： 一、溫熱療法治療孢子絲菌病模型小鼠療效觀察 (一)材料 申克孢子絲菌菌株(12628)來自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院皮膚科，為皮膚淋巴管型

2、孢子絲菌病患者的分離株。 BALB/C雌性小鼠，周齡8-10w，體重20-22g，30只，均于尾部近端皮下分2點注射菌懸液各約0.05ml(濃度約1×108個/ml)，建立孢子絲菌病小鼠模型。約兩周待出現(xiàn)皮損后隨機分為對照組和治療組，每組15只。 (二)方法 治療組接種2w后用恒溫水浴箱對小鼠尾部皮損局部水浴熱療，溫度43℃，3次/w，15min/次，共12次。對照組接種后不予任何處置。熱療開始即觀察治療反應，

3、如皮損大小變化，炎癥反應強度等。溫熱治療后觀察皮損消退記為有效，計算兩組有效的百分比。 (三)統(tǒng)計學處理 所得的數(shù)據(jù)用SPSS13軟件進行分析處理，組間的比較用校正的卡方檢驗，檢驗效能為0.05。 二、局部溫熱治療對皮損內(nèi)IFN-γ表達的影響 (一)材料 動物模型及溫熱療法同上 (二)方法及數(shù)據(jù)統(tǒng)計 20只小鼠分治療組和對照組，每組10只。加熱2次后各組小鼠接種處活檢，做HE、PA

4、S染色和免疫組化皮損內(nèi)IFN-γ染色。 光學顯微鏡下觀察IFN-γ表達陽性細胞，胞漿紅染為陽性，于200倍光鏡下每張切片選3個真皮內(nèi)炎細胞浸潤明顯的視野，計數(shù)視野內(nèi)陽性細胞占同類細胞的百分比，表達<10％記為陰性(-)。陽性細胞的標本包括四個等級：10％-25％浸潤細胞染色記為(+)，25％-50％浸潤細胞染色記為(++)，50％-75％浸潤細胞染色記為(+++)，>75％浸潤細胞染色記為(++++)。 (三)統(tǒng)計學處理

5、 采用SPSS13統(tǒng)計分析軟件處理數(shù)據(jù)。使用Mann-Whitney U檢驗，檢驗效能為0.05。 實驗結(jié)果： 一、溫熱對孢子絲菌病模型小鼠療效的觀察 接種后一周左右出現(xiàn)皮損。第二周、第三周皮損最顯著。主要表現(xiàn)為接種處紅腫、結(jié)節(jié)、潰瘍、溢膿及結(jié)痂。伴隨熱療次數(shù)增加治療組皮損紅腫消退、潰瘍愈合及結(jié)痂均較對照組快。接種后一月所有小鼠皮損開始逐漸消退，但是加熱組消退更加明顯。加熱六次即接種后一月治療組消退的占6

6、0％，而對照組占13.3％。加熱十二次即接種后四十天加熱組占80％，對照組占20％。以上P值均小于0.05，有統(tǒng)計學意義。 二、溫熱對孢子絲菌病模型小鼠皮損內(nèi)IFN-γ表達的影響 IFN-γ在表皮呈彌漫性表達，基底膜向上有減弱的趨勢。真皮毛囊及皮脂腺結(jié)構(gòu)也有表達，呈彌漫性淡染。以上正常皮膚染色結(jié)果與熱療組及對照組基本相同。真皮陽性主要表達在單核淋巴樣細胞的胞漿內(nèi)。而正常皮膚真皮幾無表達。熱療后真皮IFN-γ表達較對照組