基于療效的川產(chǎn)道地藥材附子品質(zhì)評價方法研究.pdf

1、目的：建立川產(chǎn)道地藥材附子道地性優(yōu)良療效品質(zhì)的評價方法體系?！暗赖厮幉摹笔侵笟v史悠久、產(chǎn)地適宜、品種優(yōu)良、產(chǎn)量宏豐、炮制考究、療效突出、帶有地域特點的藥材，是辨別中藥真?zhèn)?、控制質(zhì)量的重要方法。目前對道地藥材的品質(zhì)評價方法主要包括：遺傳基因、外觀性狀、化學(xué)成分、生物活性（有效性和安全性）等指標(biāo)。我們認為，道地藥材生物活性是決定其臨床療效的最重要品質(zhì)，是道地性評價方法的核心指標(biāo)。
　　故本文選擇川產(chǎn)道地藥材附子為研究對象，從遺傳基因、

2、外觀性狀、指標(biāo)成分、微量元素、生物活性等多角度多指標(biāo)對附子的道地性即優(yōu)良療效品質(zhì)進行探討，對其道地性品質(zhì)評價方法進行研究，試圖建立功效為核心的附子道地性評價方法體系。
　　方法與結(jié)果：
　　1.遺傳基因指標(biāo)研究
　　以PCR-DNA序列檢測法檢測不同產(chǎn)地附子藥材的擴增產(chǎn)物，利用CodonCode Aligner V3.7.1校對拼接，去除引物區(qū)。將所有序列用MEGA5.0軟件進行比對分析。結(jié)果表明：陜西漢中產(chǎn)附子樣品沒

3、有獲得 psbA-trnH，其他供試樣品所獲得的3條psbA-trnH序列片段長度均為317 bp，序列完全相同，沒有變異位點。
　　2.外觀形狀指標(biāo)研究
　　用游標(biāo)卡尺測定附子飲片的長、寬、厚；用色彩色差計測量附子飲片的外部顏色和內(nèi)部顏色。結(jié)果表明：云南祿勸、陜西漢中附子長、寬、厚、重與四川江油、涼山產(chǎn)附子差異顯著（p＜0.01，p＜0.01，p﹤0.05），并以四川江油產(chǎn)附子炮制品黑順片略大、略重；黑順片即藥材的外部顏色

4、顏色以陜西漢中附子較淺，并與四川江油附子差異顯著；藥材粉末即藥材的內(nèi)部顏色以四川江油附子顏色最深，并與四川涼山、陜西漢中、云南祿勸差異顯著（p＜0.01，p＜0.01，p﹤0.05）。
　　3.微量元素指標(biāo)研究
　　參照《中國藥典》2010版一部附錄ⅪD ICP-MS方法測定不同產(chǎn)地附子黑順片中銅、鐵、錳、鉛、鎘、鋅、鈣、鉻、鎳、鎂10種微量元素的含量。結(jié)果表明：除鎘元素外，不同產(chǎn)地附子黑順片中其它微量元素含量有顯著差異，微

5、量元素對藥材藥效的重要性是勿庸置疑的。
　　4.化學(xué)成分指標(biāo)研究
　　參照2010版《中國藥典》一部附子項下含量測定方法檢測不同產(chǎn)地附子黑順片及提取物中總生物堿和酯型生物堿含量。結(jié)果表明：不同產(chǎn)地附子黑順片中總生物堿含量在0.20％~0.45%之間，與文獻報道相符合[12]，雙酯型生物堿和單酯型生物堿含量均符合藥典規(guī)定的含量；附子黑順片水提物生物堿含量與飲片相比，均降低；附子醇提物樣品生物堿含量與飲片相比，總生物堿含量升高，

6、雙酯型生物堿、單酯型生物堿含量降低。無論是黑順片還是水提物和醇提物，四川江油附子總生物堿含量較其它產(chǎn)地居中，雙酯型生物堿和單酯型生物堿含量最低。
　　5．附子生物活性評價指標(biāo)的研究
　　本研究根據(jù)附子回陽救逆的功效及在心血管系統(tǒng)方面的臨床療效，選取與附子功效主治相關(guān)的藥理作用—抗休克、抗緩慢型心律失常、治療心力衰竭三個經(jīng)典的臨床應(yīng)用進行生物活性評價研究。
　　以內(nèi)毒素致小鼠死亡的保護作用觀察不同產(chǎn)地附子水提物（7.5g

7、/kg）的抗休克作用；用維拉帕米注射液造成大鼠心動過緩模型，觀察不同產(chǎn)地附子醇提物（5g/kg）對該心律失常動物HR、P-R間期、P波、QRS波等指標(biāo)變化，探討其作用機理；用戊巴比妥鈉造模大鼠急性心衰模型，各組均以給藥前各項指標(biāo)對照，16道生理記錄儀同步記錄 HR，左室內(nèi)壓（LVSP），左室內(nèi)壓最大上升速率（+dp/dtmax），左室內(nèi)壓最大下降速率（-dp/dtmin），動態(tài)觀察不同產(chǎn)地附子對急性心衰大鼠血流動力學(xué)的影響，以及大鼠腹主

8、動脈取血測定血漿中精氨酸加壓素（AVP）、內(nèi)皮素-1（ET-1）、心鈉素（ANP）、血管緊張素（AⅡ）水平的變化及腦鈉素（BNP）基因的合成與表達。
　　結(jié)果表明：不同產(chǎn)地附子水提物（7.5g/kg）均能明顯減少內(nèi)毒素攻擊所致小鼠死亡數(shù)，其中以四川江油附子作用最為明顯；四川江油附子醇提物（5g/kg）對維拉帕米注射液所致大鼠HR降低、P-R間期延長、P波幅度降低、QRS波寬大畸形有全面的改善作用，心電圖接近正常對照組；云南祿勸附子

9、醇提物（5g/kg）有提高HR、恢復(fù) P-R間期、改善 QRS波異常的作用；四川涼山附子與陜西漢中附子醇提物（5g/kg）有提高HR、恢復(fù)P-R間期的作用，但對P波、QRS波的異常作用不明顯；同時各附子組均能改善急性心衰大鼠血流動力學(xué)部分指標(biāo)，加快心率，升高左室內(nèi)壓，提高左心室最大上升速率和最大下降速率，并以道地產(chǎn)區(qū)江油附子作用最為明顯。其作用機制與降低血漿中AVP水平含量、抑制心室肌內(nèi)BNP基因的合成和表達有關(guān)，與抑制縮血管因子ET-

10、1、AⅡ水平及ANP基因表達無關(guān)。生物活性評價結(jié)果顯示：不同產(chǎn)地附子炮制品中，傳統(tǒng)附子道地產(chǎn)區(qū)四川江油附子臨床療效最明顯，生物活性最強。明顯優(yōu)于四川涼山、云南祿勸、陜西漢中附子。
　　結(jié)論：傳統(tǒng)外觀性狀、藥典規(guī)定的有效成分以及微量元素含量高低、新型中藥品質(zhì)評價方法—DNA序列檢測、藥材生物活性評價等中藥品質(zhì)評價方法，是目前作為藥材道地性優(yōu)良療效品質(zhì)的評價依據(jù)，均能從不同角度反映道地藥材的道地性品質(zhì)。但單一指標(biāo)對道地藥材道地性品質(zhì)評

11、價并不全面且存在一定的局限。本研究系統(tǒng)研究和探討生物活性與外觀性狀、化學(xué)成分、微量元素、遺傳基因的相關(guān)性，我們認為生物活性強度能直接客觀的反映藥材道地性的本質(zhì)，是附子道地性評價方法的核心指標(biāo)，是決定其臨床療效的最重要品質(zhì)。故建立以功效（生物活性）為核心的中藥質(zhì)量控制與評價的新型方法，能保證道地藥材的道地性與特色。而“基因-性狀-成分-環(huán)境-生物效應(yīng)”多指標(biāo)相結(jié)合的道地性整體評價體系的建立是道地藥材品質(zhì)評價的發(fā)展趨勢，是課題組今后努力的方