中國(guó)南方漢族人群中SCN5A基因多態(tài)位點(diǎn)和病態(tài)竇房結(jié)綜合征的關(guān)聯(lián)性.pdf

1、心律失常是影響人們身體健康的一種重要病癥，是常見的致死原因之一。分子遺傳學(xué)的重要進(jìn)展，在心律失常的發(fā)病機(jī)理的理解和治療方面為我們提供了很大的幫助。50%～75%的長(zhǎng)QT綜合征（LQTS）和15%～35%Brugada綜合征（BS）的致病基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)（LQTS：鉀通道 KCNQ1，KCNH2LQTS2，KCNE1，KCNE2，KCNJ2；鈉通道基因SCN5A；非離子通道基因ankyrin-B。BS：SCN5A）。目前對(duì)LQTS致病基因的

2、研究最多也最成熟，根據(jù)致病基因的不同分成了LQTl-LQT6六個(gè)亞型。 心臟鈉離子通道基因SCN5A的突變也可導(dǎo)致心臟傳導(dǎo)疾病和常染色體隱形病態(tài)竇房結(jié)綜合征（SSS），散發(fā)型SSS也與心臟起搏鉀離子通道基因HCN4的突變有關(guān)。在一個(gè)先天性SSS病人中，發(fā)現(xiàn)位于染色體15q24-25的人類超極化激活環(huán)核苷調(diào)控的通道4（HCN4基因）的第一個(gè)堿基缺失的雜合突變HCN4-573X[25]。HCN4基因編碼一個(gè)具有6個(gè)跨膜片段的鉀通道，

3、負(fù)責(zé)形成心臟起搏電流If，是竇房結(jié)細(xì)胞中心舒張期除極化過程的決定因素。突變的HCN4-573X通道對(duì)胞內(nèi)升高的cAMP水平不敏感，并有顯性-否定效應(yīng)。 心律失常的基因研究還只是初步階段，發(fā)展迅速，并逐步地顯示指導(dǎo)臨床診治的重要性。通過連鎖分析及候選基因法已初步定位和確認(rèn)了一些遺傳性心律失常的基因，進(jìn)一步對(duì)基因突變的分型和單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）檢測(cè)可用于心律失常的危險(xiǎn)

4、分型并指導(dǎo)作用。 SCN5A為3號(hào)染色體上編碼的鈉離子通道蛋白的基因，SCN5A基因的突變可導(dǎo)致心鈉電流紊亂，引發(fā)多種嚴(yán)重性的心律失常包括長(zhǎng)QT綜合征3型（long QT syndrome3，LQT3）Brugada綜合征、特發(fā)性室顫、心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)疾病等。Wang等首先報(bào)道發(fā)現(xiàn)SCN5A基因突變是LQTS3發(fā)病的基因基礎(chǔ)；Chen等報(bào)道發(fā)現(xiàn)Brugada綜合征的發(fā)病與SCN5A基因多態(tài)位點(diǎn)H558R相關(guān)；有報(bào)道美國(guó)非洲人種SC

5、N5A的S1102Y多態(tài)位點(diǎn)少數(shù)等位基因頻率7%但能明顯增加室性心律失常8倍，最近有研究發(fā)現(xiàn)SCN5A功能缺失突變和心肌病及房顫相關(guān)。Gouas等研究發(fā)現(xiàn)SCN5A基因的多態(tài)位點(diǎn)H558R、D1819D與QTc間期的長(zhǎng)短明顯相關(guān)。LQT3是一組伴有竇緩或竇停的綜合征。有研究表明引起的LQT3的SCN5A1795insD突變可使鈉通道的失活不完全，減慢心率，引起竇緩。我們知道病態(tài)竇房結(jié)綜合征（sick sinus syndrome，SSS

6、）代表多種由竇房結(jié)功能障礙而導(dǎo)致的疾病，臨床上伴有明顯暈厥，頭昏眼花，乏力等癥狀；在心電圖上主要表現(xiàn)為竇性心動(dòng)過緩，竇性停博和竇房阻滯，與竇性心動(dòng)過緩共存的房性心動(dòng)過速也有出現(xiàn)；且已有研究報(bào)道心臟鈉通道基因SCN5A的雜合突變可導(dǎo)致常染色體隱性SSS。所有這些SCN5A突變可導(dǎo)致鈉通道功能喪失或鈉通道調(diào)控能力顯著削弱。因此，我們推測(cè)SSS除了外在的致病因素外，基因的異?？赡苁怪子诎l(fā)生SSS，不能排除SCN5A基因的多態(tài)位點(diǎn)H558R

7、 D1819D4299+53T>C等與竇房結(jié)功能相關(guān)性。本次實(shí)驗(yàn)在于闡明中國(guó)南方漢族人群中SCN5A基因多態(tài)位點(diǎn)C5457T（D1819D）與SSS的相關(guān)性。 目的: 闡明中國(guó)南方漢族人群中SCN5A基因多態(tài)位點(diǎn)C5457T（D1819D）與SSS的相關(guān)性。 研究對(duì)象和方法: 1、選取2006年10月至2007年12月在我科住院的SSS患者和因SSS已經(jīng)安裝起搏器來門診行起搏程控的患者，籍貫為長(zhǎng)江以南省市

8、的漢族人108（男55，女53）例，年齡（62±10）歲，并排除并發(fā)心肌病、先天性心臟病、瓣膜性心臟病、甲狀腺功能亢進(jìn)或減低，高血壓、冠心病，等疾病，且均符合《實(shí)用內(nèi)科學(xué)》SSS診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組為南方健康漢族人123（男72，女51）例，年齡（61±9）歲。兩組年齡與性別構(gòu)成均無顯著差異。 2、確定研究的SCN5A基因的多態(tài)位點(diǎn)根據(jù)Iwasa等報(bào)道的SCN5A基因的多態(tài)位點(diǎn)同時(shí)結(jié)合Chen等對(duì)120份健康南方漢族人群檢測(cè)SCN5

9、A基因多態(tài)位點(diǎn)結(jié)果，選取D1819D。 3、外周血白細(xì)胞DNA的提取采用常規(guī)酚-氯仿法抽提外周血白細(xì)胞DNA。 4、PCR擴(kuò)增根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)獲取SCN5A基因（Genebank NM000335，AP006241.1）的序列，利用Primer primer5軟件設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增包含D1819D多態(tài)位點(diǎn)的相應(yīng)片段。正向引物為ATTGCCATCATCCTGGAGA，反向引物為CTTTTGGTGAAGGCAAAGAGA，PC

10、R擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為278 bp。 5、所有對(duì)象的基因鑒定采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（RFLP），以限制性內(nèi)切酶為HinlI進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性基因鑒定。 6、隨機(jī)抽取PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化和直接測(cè)序，純化和測(cè)序步驟由大連寶生物公司完成。所用測(cè)序儀為AB1377自動(dòng)測(cè)序儀，驗(yàn)證RFLP結(jié)果的準(zhǔn)確性。 7、統(tǒng)計(jì)方法統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0軟件。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)，單變

11、量Logistic回歸分析D1819D基因多態(tài)性與SSS的關(guān)系，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1、SCN5A基因的D1819D多態(tài)位點(diǎn)在中國(guó)華南地區(qū)漢族人群中分布的3種基因型20 g/L瓊脂糖凝膠電泳分析的結(jié)果表明：D1819D多態(tài)位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物顯示為278 bp的DNA條帶。HinlI酶切后得到3種DNA條帶。野生純合子（CC）基因型可酶切成兩個(gè)片段：123 bp、155 bp；雜合子（CT）基因酶切

12、后為三個(gè)片段顯示為278 bp、155 bp、123 bp；突變的純合子（TT）基因型酶切后為一個(gè)片段，凝膠分析顯示為278 bp-個(gè)條帶。隨機(jī)抽取PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化和直接測(cè)序，驗(yàn)證了RFLP結(jié)果的準(zhǔn)確性。 2、SSS組108（男55，女53）例，年齡（61.83±10.49）歲。正常人組123（男72，女51）例，年齡（60.76±9.47）歲兩組年齡之間比較采t檢驗(yàn)，t值為0.814p值為0.416。即兩組之間年齡無顯著差異

13、。兩組性別之間的比較采用x2檢驗(yàn)，x2為1.346，p值為0.246。即兩組間性別無顯著差異。D1819D SNP等位基因頻率在人群中的分布符合Handy-Weinberg平衡，SSS組和正常對(duì)照組基因型頻率分布基于Handy-Weinberg公式計(jì)算結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=4.103 and3.604，P=0.129and0.165）。 3、D1819D基因多態(tài)位點(diǎn)三種基因型在SSS組和正常人組中的分布意義正常對(duì)照組（12

14、3例），CC基因型在占39.0%（48），CT基因型36.6%（45）TT基因型24.3%（30），其中C等位基因57.3%（141），T等位基因42.7%（105）； SSS組（108例）的患者基因型分布特點(diǎn)：CC基因型22.2%（24例）、CT基因型44.4%（48例）、TT基因型33.3%（36例），其中C等位基因占44.4%（96）、T等位基因占55.6%（120）。SSS組與對(duì)照組三種基因型分布差異有顯著性意義（X2=7.70

15、1p=0.021），SSS組TT基因型、T等位基因比例明顯高于CC基因型，和C等位基因。SSS組和對(duì)照組基因型的比較，結(jié)果顯示病例組的CC基因型頻率顯著低于對(duì)照組，（X2=7.567p=0.006，OR=0.446，95%CI0.250-0.798）提示CC基因型可能是SSS發(fā)生的保護(hù)基因。 4、D1819D多態(tài)位點(diǎn)對(duì)SSS的相對(duì)危險(xiǎn)度單變量logistic回歸分析D1819D多態(tài)位點(diǎn)與SSS的關(guān)系雖然TT基因型不能顯著增加SS