非甾體抗炎藥對(duì)大鼠小腸黏膜的影響.pdf

1、目的：非甾體抗炎藥(non—steroidal anti—inflammatory drugs，NSAIDs)是一類(lèi)不含有甾體結(jié)構(gòu)的抗炎藥，該類(lèi)藥物具有抗炎、抗風(fēng)濕、止痛、退熱和抗凝血等作用。在臨床上，短期服用NSAIDs主要用于緩解各種疼痛、退熱及圍手術(shù)期的鎮(zhèn)痛，長(zhǎng)期服用主要用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatiod arthritis，RA)及骨性關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis，OA)，此外尚可用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊

2、柱炎、脊椎關(guān)節(jié)炎等，也可用于治療一些急性非炎癥性疾病，如急性肌肉骨胳疾病，下腰背部疼痛、關(guān)節(jié)痛、普通感冒、急性痛風(fēng)等。目前NSAIDs是全球使用最多的藥物種類(lèi)之一。據(jù)估計(jì)全世界每年NSAIDs處方在10億張以上，每天約有近3000萬(wàn)人服用NSAIDs。 NSAIDs雖然在臨床上應(yīng)用廣泛，但卻有明顯不良反應(yīng)，其中最常見(jiàn)、也最具臨床意義的就是胃腸黏膜損傷。有研究證實(shí)，在美國(guó)發(fā)生的藥物不良反應(yīng)中，21％為NSAIDs所致的胃腸道反應(yīng)

3、。在英國(guó)，報(bào)道的藥物不良反應(yīng)中25％與應(yīng)用NSAIDs有關(guān)。NSAIDs所致胃腸道損害常見(jiàn)的有出血、穿孔和幽門(mén)梗阻，還可引起過(guò)敏反應(yīng)、肝腎功能損害及血液系統(tǒng)、皮膚結(jié)締組織和呼吸系統(tǒng)并發(fā)癥。在美國(guó)，每年約6000人死亡歸咎于服用NSAIDs。 NSAIDs相關(guān)的胃腸道不良反應(yīng)是一個(gè)極為廣泛的概念，既包括諸如惡心，燒心、消化不良等癥狀，又包括消化性潰瘍(peptic ulcer，PU)及其嚴(yán)重并發(fā)癥，如出血、穿孔、胃排空障礙等，甚

4、至可導(dǎo)致患者死亡。每年約2％～4％的NSAIDs使用者會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的胃腸并發(fā)癥。由于這些并發(fā)癥的發(fā)生常無(wú)任何報(bào)警癥狀，因此臨床危害極大。 長(zhǎng)期以來(lái)人們比較重視NSAIDs引起的胃損害，而流行病學(xué)調(diào)查顯示由于服用NSAIDs引起下消化道的副作用也值得關(guān)注。但目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)NSAIDs引起下消化道黏膜尤其是小腸黏膜損害的研究報(bào)道甚少。隨著非處方藥(over thecounter，OTC)類(lèi)的NSAIDs的廣泛應(yīng)用，NSAIDs所致小腸

5、黏膜損傷日漸突出，但由于癥狀隱匿，人們對(duì)其沒(méi)有足夠的認(rèn)識(shí)，缺乏有效的診斷手段而誤診、漏診，延誤病情，由此引發(fā)的小腸損害發(fā)病率將進(jìn)一步增長(zhǎng)。因此，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)NSAIDs相關(guān)性下消化道黏膜損傷的研究，以利防治。 本研究旨在觀(guān)察非甾體抗炎藥對(duì)大鼠小腸黏膜屏障的影響及形態(tài)變化，探討提高保護(hù)患者腸黏膜屏障功能的辦法。 材料與方法： 一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 32只12周齡雄性Sprague—Dawley大鼠，體質(zhì)量200g

6、-220g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供；分為藥物損傷模型組和對(duì)照組，各16只；2組大鼠分別于給藥后第1d(24h)和5d進(jìn)行有關(guān)指標(biāo)的觀(guān)察和測(cè)定，各時(shí)相點(diǎn)均為8只。 二、方法 1、動(dòng)物損傷模型制備：將雙氯芬酸鈉(戴芬，藤澤德國(guó)公司，國(guó)藥準(zhǔn)字J20050064)溶入0.9％生理鹽水，參照人類(lèi)長(zhǎng)期口服劑量(150mg/d)折算成大鼠口服劑量：15 mg/kg·d．，分2次灌胃(將雙氯芬酸鈉150mg置入生理鹽水100m

7、l中，超聲乳化后配置成1.5mg/ml的混懸液，然后根據(jù)大鼠體質(zhì)量按1ml/100g劑量灌胃．)，對(duì)照組使用相同劑量(1ml/100g)的生理鹽水。2組大鼠分別于給藥后第1d(24h)和第5d處死，取空腸、回腸進(jìn)行觀(guān)察。 2、胃、小腸大體損傷評(píng)分：大鼠禁食不禁水24h，用1％戊巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射麻醉后處死。剖腹取出胃，沿胃大彎剪出胃壁并使胃腔黏膜外翻，生理鹽水漂洗3遍胃黏膜后，以游標(biāo)卡尺測(cè)定潰瘍指數(shù)，按Guth標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)記分。小腸

8、黏膜大體損傷評(píng)分按潰瘍和粘連分別進(jìn)行評(píng)分，總分為兩者之和。 3、小腸黏膜組織處理及形態(tài)學(xué)觀(guān)察：距幽門(mén)25cm處切取空腸腸段2 cm，備用。距回盲部5cm處向近端切取回腸腸段2 cm，備用。將切取之組織放入10％福爾馬林溶液中固定。常規(guī)切片，HE染色，采用Chiu氏6級(jí)評(píng)分法評(píng)價(jià)腸黏膜損傷程度。光鏡下每個(gè)樣本隨機(jī)計(jì)數(shù)20個(gè)視野。Carl Zeiss Imaging Systems圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行絨毛高度、黏膜厚度、黏膜截面積等定量

9、分析。 4、腸黏膜超微結(jié)構(gòu)觀(guān)察：各組分別取1mm×1 mm末段回腸組織標(biāo)本，2.5％戊二醛固定。經(jīng)脫水、置換等步驟后用透射電子顯微鏡觀(guān)察腸黏膜超微結(jié)構(gòu)。 5、EGF免疫組織化學(xué)檢測(cè)及圖像分析：采用免疫組織化學(xué)方法(二步法)。自動(dòng)染色機(jī)復(fù)染、透明后封片，顯微鏡下觀(guān)察，以胞漿和/或質(zhì)膜著棕色者為陽(yáng)性染色。 每張切片所要分析的部位顯微鏡下拍攝3-5張照片，單盲情況下進(jìn)行圖象分析，計(jì)算陽(yáng)性面積、總光密度和陽(yáng)性指數(shù)。

10、 三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以．(-X)±s表示，采用單因素方差分析；非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)及四分位全距表示，采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 一、形態(tài)組織學(xué)改變 1、胃、小腸黏膜大體觀(guān)察：對(duì)照組大鼠灌胃后全部存活；而模型組于第4天死亡1只。模型組胃黏膜損傷評(píng)分與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。模型組第1d小腸黏膜散在紅斑、糜爛和潰瘍，潰瘍廷腸系膜側(cè)分布；第5d小腸黏膜可見(jiàn)出血、穿孔和

11、竇道形成，其大體損傷評(píng)分均高于對(duì)照組(P＜0.05)。 2、光學(xué)顯微鏡下組織學(xué)改變：對(duì)照組大鼠小腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，偶可見(jiàn)絨毛上皮缺損和少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。造模組第1d大鼠可見(jiàn)腸絨毛腫脹、縮短、增粗，頂端部分破損或斷裂；第5d可見(jiàn)黏膜局灶糜爛、壞死，黏膜下間隙增大，固有層水腫明顯伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，出現(xiàn)上皮細(xì)胞變性、壞死，部分絨毛融合、縮短，甚至壞死、脫落、缺損，造成固有層裸露，黏膜和黏膜下層大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，第1d和第5d Chiu氏

12、評(píng)分中位數(shù)分別為3.5分和5分，與對(duì)照組評(píng)分中位數(shù)0分相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。造模第1d大鼠空、回腸絨毛高度分別為126.9±32.0μm和118.6±22.9μm，較對(duì)照組顯著降低(169.2±25.5μm和145.8±25.2μm，P＜0.05)，而空、回腸黏膜厚度、黏膜截面積和對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性，但有下降趨勢(shì)；第5d大鼠空、回腸絨毛高度(73.4±25.4μm和109.3±17.6μm)與對(duì)照組相比(164.

13、7±21.2μm和155.7±48.0μm)顯著降低；黏膜厚度(123.8±51.6μm和165.7±37.4μm)與對(duì)照組相比(235.7±48.0μm和236.3±60.9μm)顯著變??；黏膜截面積(2.48±1.01 mm2和3.27±0.76 mm2)與對(duì)照組相比(4.66±2.11 mm2和4.54±1.12 mm2)顯著變小，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 3、超微病理結(jié)構(gòu)變化：透射電鏡下見(jiàn)模型組第1d大鼠小

14、腸黏膜微絨毛水腫、排列紊亂；線(xiàn)粒體腫脹，部分峪減少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)出現(xiàn)不同程度擴(kuò)張。細(xì)胞間連接開(kāi)始出現(xiàn)部分增寬，第5d小腸黏膜上皮微絨毛脫落更為明顯，細(xì)胞連接斷裂破壞嚴(yán)重。 二、EGF表達(dá)變化 免疫組化示EGF陽(yáng)性表達(dá)主要見(jiàn)于小腸絨毛膜上皮細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿。造模第1d，大鼠空、回腸黏膜EGF陽(yáng)性面積(3409.85±1514.32μm2和3874.09±1313.03μm2)、總光密度(1203.13±569.90和1

15、339.49±467.72)和陽(yáng)性指數(shù)(0.017±0.008和0.019±0.006)較對(duì)照組(7495.11±4557.88μm2和7703.04±4165.60μm2；2952.20±2047.92和2873.31±1749.19；0.041±0.028和0.040±0.024)顯著下降(P＜0.05)，空、回腸黏膜EGF表達(dá)無(wú)顯著差異。第5d空、回腸黏膜陽(yáng)性面積(3193.45±1695.65μm2和2919.19±1671.5

16、5μm2)、總光密度(1120.44±639.58和1034.45±615.47)和陽(yáng)性指數(shù)(0.016±0.009和0.014±0.008)較對(duì)照組(6502.51±2364.60μm2和7001.04±1894.89μm2；2471.33±1037.67和2623.44±796.39；0.034±0.014和0.034±0.011)下降明顯(P＜0.05)，但與第1d相比，雖有下降趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 結(jié)論

17、： 1、常規(guī)治療劑量雙氯氛酸鈉口服所引起的大鼠小腸黏膜損害比胃粘膜損害更常見(jiàn)和顯著。其主要致病機(jī)制包括直接黏膜破壞、線(xiàn)粒體傷害、細(xì)胞間連接完整性的破壞而使上皮通透性增高。 2、常規(guī)治療劑量雙氯氛酸鈉可致大鼠小腸黏膜機(jī)械屏障功能受損，大體表現(xiàn)為紅斑、糜爛、潰瘍、穿孔和竇道形成，其潰瘍多沿腸系膜側(cè)分布；組織學(xué)表現(xiàn)為小腸黏膜上皮細(xì)胞變性、壞死、剝脫，小腸絨毛融合、縮短，甚至壞死、脫落、缺損，造成固有層裸露。空、回腸絨毛高度顯著