子宮內(nèi)膜癌組織中PI3K-p110β、Akt及Bad的表達及意義.pdf

1、目的：⑴檢測PI3K-P110β、Akt及Bad在增殖期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜非典型增生及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達情況，探討上述三個指標在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用。⑵通過RNAi探討PI3K-P110β對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞凋亡的影響。 方法：①免疫組化SP法分析PI3K-P110β、Akt及Bad在增殖期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜非典型增生及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達情況。②Western blot分析PI3K-P110β、

2、Akt及Bad在增殖期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜非典型增生及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達情況。③構建PI3K-P110β siRNA的表達載體，并轉染Ishikawa細胞。④逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)分析轉染前后Ishikawa細胞中PI3K-P110β的表達情況。⑤利用流式細胞技術(Hoechst33342/PI雙染檢測法)分析轉染前后Ishikawa細胞的凋亡變化。 結果：⑴通過免疫組化SP法研究PI3K-P110β及Akt在

3、增殖期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜非典型增生及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達，結果顯示二者均主要在胞質(zhì)內(nèi)表達，與增殖期子宮內(nèi)膜組織相比較，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達量明顯增高(P<0.05)。采用Western blot分析PI3K-P110β及Akt的表達量，結果與免疫組化圖像分析的結果一致，在不同類型的子宮內(nèi)膜組織中PI3K-P110β及Akt蛋白的表達差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。⑵通過免疫組化SP法研究Bad在增殖期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜非

4、典型增生及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達，結果顯示Bad主要在胞質(zhì)內(nèi)表達，與增殖期子宮內(nèi)膜組織相比較，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達降低(P<0.05)。采用Western blot分析Bad的表達量，結果與免疫組化圖像分析的結果一致，在不同類型的子宮內(nèi)膜組織中Bad蛋白的表達差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。⑶構建三對siRNA重組質(zhì)粒pGCsilencerTMU6/Neo/GFP/PI3K-P110β siRNA，應用真核轉染技術成功的將

5、上述三對重組質(zhì)粒及陰性對照質(zhì)粒轉染子宮內(nèi)膜癌細胞系Ishikawa。⑷通過RT-PCR方法檢測pGCsi-PI3K-P110β1、pGCsi-PI3K-P110β2、pGCsi-PI3K-P110β3對Ishikawa細胞中PI3K-P110β mRNA的表達抑制率，分別為88.90％、70.19％和96.43％。干擾組與對照組分別比較，抑制率明顯增高。⑸通過流式細胞技術(Hoechst33342/PI雙染法)檢測轉染pGCsi-PI3

6、K-P110β1、pGCsi-PI3K-P110β2、pGCsi-PI3K-P110β3的Ishikawa細胞凋亡率，分別為18，3％、12.2％和14.1％，同轉染了pGCsi—neg組、脂質(zhì)體對照組和空白對照組相比，凋亡明顯增高。 結論：①PI3K-P110β在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中高表達，提示PI3K-P110β在子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮著重要作用。但在不同手術病理分期和不同組織病理學分級的子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中PI