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文檔簡介
1、第一部分、SERT抑制劑氟西汀對血小板的作用
目的:通過檢測氟西汀對血小板聚集、釋放的影響,確定其對血小板功能的影響。
方法:采用血小板聚集檢測儀與流式細(xì)胞儀觀察不同濃度的氟西汀對血小板聚集、釋放功能的影響。
結(jié)果:氟西汀能顯著性的抑制低劑量膠原誘導(dǎo)的小鼠和人的洗滌血小板聚集,以及低劑量膠原誘導(dǎo)的人PRP聚集,并呈劑量依賴性,但對高劑量膠原誘導(dǎo)的小鼠洗滌血小板以及人富血小板血漿聚集無影響;氟西汀能顯著的抑制
2、膠原刺激的小鼠洗滌血小板P-selectin表達(dá)和ATP釋放。
結(jié)果如下:①溶媒組、0.1μM、1μM和10μM氟西汀組對低劑量膠原刺激的小鼠洗滌血小板聚集率分別是64.30±7.79%、48.20±8.04%、34.50±6.34%和11.50±13.53%,而對高劑量膠原誘導(dǎo)的小鼠洗滌血小板聚集影響微弱。②溶媒組、0.1μM、1μM和10μM氟西汀組對人洗滌血小板低劑量膠原誘導(dǎo)的聚集率分別為59.57±3.90%、47.1
3、4±6.16%、27.86±5.50%和10.57±3.54%;此外,氟西汀明顯抑制低劑量膠原誘導(dǎo)的人PRP聚集,并不影響高劑量膠原誘導(dǎo)的人PRP聚集。③氟西汀能顯著抑制膠原刺激的血小板P-selectin的表達(dá)與ATP釋放。
結(jié)論:氟西汀能劑量依賴性地抑制低劑量膠原誘導(dǎo)的血小板聚集,還能顯著地抑制膠原刺激的血小板α顆粒與致密顆粒的釋放。
第二部分、氟西汀對血小板內(nèi)信號(hào)通路的影響
目的:通過檢測氟西汀對小鼠
4、和人血小板內(nèi)信號(hào)蛋白分子的磷酸化的影響,分析SERT對血小板功能的影響的機(jī)制。
方法:洗滌血小板孵育氟西汀后,給予膠原刺激血小板活化,裂解細(xì)胞,采用Western Blot技術(shù)檢測Akt(Ser473/474)、GSK3β(S9)和ERK1/2(E4)、p38 MAPK(T180/Y182)的磷酸化表達(dá)。
結(jié)果:10μM氟西汀能明顯地抑制膠原刺激的Akt(Ser473/474)與其下游GSK3β(S9)磷酸化,對ER
5、K1/2(E4)的磷酸化影響也較強(qiáng),同時(shí)對小鼠的p38 MAPK(T180/Y182)的磷酸化沒有影響,但對人的p38 MAPK卻有輕微抑制作用。
結(jié)論:氟西汀可能作用于SERT,從而通過調(diào)控血小板PI3K/Akt信號(hào)通路發(fā)揮抑制血小板功能的作用。
第三部分、5-HT類似物對血小板及其信號(hào)通路的作用
目的:通過加入5-HT類似物與5-HT2受體阻斷劑酮色林,檢測小鼠血小板聚集與胞內(nèi)信號(hào)蛋白分子的磷酸化水平,
6、確定SERT對血小板功能的影響。
方法:洗滌血小板預(yù)孵育氟西汀或酮色林后,再孵育5-HT類似物,給予膠原相關(guān)肽刺激血小板活化,觀察聚集并裂解細(xì)胞,采用Western Blot技術(shù)檢測Akt(Ser473/474)、GSK3β(S9)和ERK1/2(E4)、p38 MAPK(T180/Y182)的磷酸化表達(dá)。
結(jié)果:10μM氟西汀能明顯的抑制膠原相關(guān)肽刺激的血小板聚集和Akt(Ser473/474)與其下游GSK3β(
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