胞質(zhì)M-CSF通過下調(diào)DNMT3b的活性降低人乳腺癌MCF-7細(xì)胞對5-FU和ADR的藥物敏感性.pdf

1、目的：探討胞質(zhì)M-CSF誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞對5-FU和ADR耐藥的分子機制。
　　方法：熒光定量PCR檢測DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3b mRNA,MDR-1 mRNA的表達(dá)；epiquik DNA methyltransferase3B Activity/Inhibitor Screening Assay Core Kit試劑盒分析 DNMT3b活性的變化；MSP實驗分析MDR-1基因啟動子甲基化水平的改變；Western

2、 Blotting檢測DNMT3b以及P-gp的表達(dá)；MTT分析MCF-7細(xì)胞增殖活性。
　　結(jié)果：熒光定量PCR實驗結(jié)果顯示：MCF-7-M細(xì)胞DNMT3b mRNA的表達(dá)水平顯著低于 MCF-7細(xì)胞和 MCF-7-C細(xì)胞(p<0.05)，MCF-7-M細(xì)胞中 MDR-1 mRNA的表達(dá)水平明顯高于MCF-7細(xì)胞和MCF-7-C細(xì)胞(p<0.05)，MCF-7細(xì)胞和MCF-7-C細(xì)胞中DNMT3b mRNA和MDR-1 mRNA

3、的表達(dá)水平則無明顯差異(p>0.05)?；钚苑治鰧嶒灲Y(jié)果顯示：MCF-7-M細(xì)胞中DNMT3b的活性顯著低于MCF-7細(xì)胞和 MCF-7-C細(xì)胞(p<0.05)。MSP實驗結(jié)果顯示：MCF-7-M細(xì)胞MDR-1基因啟動子甲基化水平低于 MCF-7細(xì)胞和 MCF-7-C細(xì)胞(p<0.05)。Western Blotting實驗結(jié)果顯示：MCF-7-M細(xì)胞中DNMT3b蛋白的表達(dá)低于MCF-7細(xì)胞和 MCF-7-C細(xì)胞(p<0.05)，MC

4、F-7-M細(xì)胞 P-gp的表達(dá)則顯著高于MCF-7細(xì)胞和MCF-7-C細(xì)胞(p<0.05)。MTT實驗結(jié)果顯示：在不同藥物不同濃度的抗腫瘤藥物作用下，MCF-7-M存活率均明顯高于 MCF-7細(xì)胞和 MCF-7-C細(xì)胞(p<0.05),MCF-7-C細(xì)胞的存活率相對 MCF-7細(xì)胞則無明顯差異(p>0.05)，MCF-7細(xì)胞、MCF-7-C細(xì)胞 MCF-7-M細(xì)胞對5-FU的IC50值分別為641.741±119.337、668.295

5、±78.188和3359.326±343.345μmol/L；對 ADR的IC50值分別為3.073±0.059、2.853±0.086和7.234±0.047μmol/L(p<0.05)。
　　結(jié)論：胞質(zhì)M-CSF可下調(diào)MCF-7細(xì)胞DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3b表達(dá)和降低其活性、下調(diào)MDR-1基因的甲基化水平，上調(diào)P-gp的表達(dá)。胞質(zhì)M-CSF通過降低DNMT3b活性和MDR-1基因的甲基化水平，上調(diào)P-gp的表達(dá)，誘導(dǎo)MCF-