陳皮多甲氧基黃酮有效部位研究.pdf

1、陳皮為蕓香科柑桔屬植物橘(CitrusreticulateBlanco)及其栽培變種的干燥成熟果皮。性溫，味辛、苦，歸脾、肺經(jīng)，屬于理氣藥。具有理氣調(diào)中、化痰燥濕的功效。 近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)陳皮中多甲氧基黃酮類成分的抗癌活性報(bào)道越來(lái)越多，提示這類成分具有潛在的抗癌作用，具有新藥開發(fā)價(jià)值。 因此，本論文對(duì)陳皮中多甲氧基黃酮有效部位進(jìn)行了研究，共分為九章。 第一章對(duì)柑桔屬植物中多甲氧基黃酮類成分及其藥理活性進(jìn)行了綜述，

2、并對(duì)中藥滴丸的制備工藝進(jìn)行了總結(jié)，共引用文獻(xiàn)53篇。 第二章對(duì)陳皮多甲氧基黃酮有效部位進(jìn)行了化學(xué)成分研究，分離得到了5個(gè)化合物，鑒定了其中4個(gè)，其中有三個(gè)為多甲氧基黃酮分別為：川陳皮素(nobiletin，5，6，7，8，3’，4’-六甲氧基黃酮)，3，5，6，7，8，3’，4’-七甲氧基黃酮，Natsudaidai(3-羥基，5，6，7，8，3’，4’-六甲氧基黃酮)，一個(gè)為β-谷甾醇(β-sitosterol)。 第

3、三章陳皮中多甲氧基黃酮有效部位的制備工藝研究首先優(yōu)選了多甲氧基黃酮有效部位的提取工藝。以川陳皮素、3，5，6，7，8，3’，4’-七甲氧基黃酮、Natsudaidai，的轉(zhuǎn)移率為檢測(cè)指標(biāo)，對(duì)陳皮的提取工藝進(jìn)行了考察，經(jīng)數(shù)據(jù)分析，得出最佳提取工藝為：A2％乙醇，B2倍量，提取C2次，每次D2小時(shí)。 其次考察了陳皮中多甲氧基黃酮有效部位的純化富集工藝。最終確定用乙酸乙酯對(duì)陳皮提取物萃取2次后，用硅膠吸附、裝柱，以混合溶劑石油醚和乙酸

4、乙酯(E1：F1)洗脫5BV，洗去雜質(zhì)；再用混合溶劑石油醚和乙酸乙酯(G2：H2)洗脫6BV，洗下有效部位。 第四章多甲氧基黃酮有效部位的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究1采用紫外法測(cè)定有效部位中多甲氧基黃酮的含量。以川陳皮素(nobiletin)為對(duì)照品，檢測(cè)波長(zhǎng)333nm，所得線性方程為：y=64.459x+0.0092r=0.9996(n=5)。表明川陳皮素(nobiletin)在333nm檢測(cè)波長(zhǎng)下，濃度在0.001635～0.01475m

5、g/ml之間與吸光度成良好線性關(guān)系。有效部位中多甲氧基黃酮含量為50％左右，加樣回收率為97.95％，RSD=2.69％(n=5)。 2采用高效液相法對(duì)有效部位中川陳皮素(nobiletin)、3，5，6，7，8，3’，4’-七甲氧基黃酮、Natsudaidai進(jìn)行了含量測(cè)定。川陳皮素(nobiletin)標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=3343.4x-1.3383r=0.9999(n=5)，表明川陳皮素在0.0654～0.654ug范圍內(nèi)質(zhì)量與

6、峰面積成線性關(guān)系。經(jīng)測(cè)定有效部位中川陳皮素(nobiletin)含量為11.5％，加樣回收率為96.71％，RSD=1.19％(n=5)。七甲氧基黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=3306.8x+0.1049r=0.9999(n=5)表明3,5,6,7,8,3’，4’-七甲氧基黃酮在0.0732～0.732ug范圍內(nèi)質(zhì)量與峰面積成線性關(guān)系。經(jīng)測(cè)定有效部位中3，5，6，7，8，3’，4’-七甲氧基黃酮含量為20％，加樣回收率為97.8％，RSD=1.85

7、％(n=5)。Natsudaidai標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=2584.1x-21.957r=0.9999(n=6)表明Natsudadai在0.07～0.875ug范圍內(nèi)質(zhì)量與峰面積成線性關(guān)系。經(jīng)測(cè)定有效部位中Natsudaidai含量為8.22％，加樣回收率為98.52％，RSD=2.1％(n=5)。有效部位中所測(cè)三種多甲氧基黃酮總含量為40％左右，川陳皮素(nobiletin)，3，5，6，7，8，3’，4’-七甲氧基黃酮，Natsudaid

8、ai三種成分含量之比為7：12：5。并且通過(guò)測(cè)定檢測(cè)波長(zhǎng)下三種對(duì)照品的響應(yīng)值確定了僅以3,5,6,7,8,3’，4’-七甲氧基黃酮為對(duì)照測(cè)定三種多甲氧基黃酮的計(jì)算公式，方便了測(cè)定。 第五章有效部位的指紋圖譜的建立用HPLC法建立了陳皮多甲氧基黃酮有效部位的指紋圖譜，通過(guò)考察七批有效部位指紋圖譜，建立了有效部位的對(duì)照指紋圖譜。 第六章多甲氧基黃酮有效部位及七甲氧基黃酮單體體內(nèi)外抗腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)第一部分為多甲氧基黃酮有效部位及

9、七甲氧基黃酮單體體外MTT實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)用MTT法觀察了多甲氧基黃酮有效部位及七甲氧基黃酮單體在不同濃度下對(duì)人肝癌細(xì)胞株Bel-7402、人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-116、人胃癌細(xì)胞株BGC-823、人膀胱癌細(xì)胞株EJ、人食管癌細(xì)胞株CaEs-17的殺傷作用。發(fā)現(xiàn)有效部位的活性優(yōu)于單體的活性。 第二部分為體內(nèi)藥理實(shí)驗(yàn)。以小鼠皮下移植S180肉瘤為動(dòng)物模型，用陳皮提取物灌胃給藥，結(jié)果表明陳皮粗提物對(duì)小鼠移植性腫瘤的生長(zhǎng)有抑制趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)