苯那普利和纈沙坦聯(lián)合應用對腎小球硬化的影響及其作用機制.pdf

1、第一部分:苯那普利和纈沙坦聯(lián)合應用對腎小球硬化及系膜基質(zhì)的影響 目的:探討血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotensin-convertingenzymeinhibitor,ACEI)-苯那普利和血管緊張素Ⅱ1-型受體拮抗劑(angiotensinⅡtype-1receptorantagonist，AT1RA)-纈沙坦聯(lián)合應用對腎小球硬化的影響及其作用機制。 方法:60只SD大鼠隨機均分為五組，即正常對照組(對照組)、模

2、型組、苯那普利治療組(苯那普利組)、纈沙坦治療組(纈沙坦組)及苯那普利和纈沙坦聯(lián)合治療組(聯(lián)合組)，每組12只。對模型組和三治療組大鼠行單側(cè)腎臟切除，1周后給予阿霉素(5mg/kg)尾靜脈注射，建立腎小球硬化模型。自注射阿霉素后，苯那普利和纈沙坦兩組分別給予苯那普利6mg/kg.d、纈沙坦20mg/kg.d灌胃，聯(lián)合組給予苯那普利3mg/kg.d、纈沙坦10mg/kg.d聯(lián)合灌胃，12周后全部處死。觀察各組大鼠的尿蛋白、血白蛋白、膽固醇

3、等生化值及腎臟病理改變，免疫組化法檢測腎臟組織中Ⅳ型膠原和纖維連接蛋白的表達。 結(jié)果:(1)聯(lián)合組尿蛋白自第5周起較模型組明顯降低(P＜0.05)，苯那普利和纈沙坦兩組自第7周起才較模型組明顯降低(P＜0.01)，12周時纈沙坦組、聯(lián)合組尿蛋白小于苯那普利組。(2)實驗結(jié)束時，三治療組血白蛋白均較模型組明顯增高(P＜0.05)。(3)腎小球硬化指數(shù)(GSI)三治療組較模型組明顯降低(P均＜0.01)，但三治療組之間無顯著差異。(

4、4)免疫組化結(jié)果顯示，Ⅳ型膠原和纖維連接蛋白在對照組表達最少(P均＜0.01)，模型組表達最強(P＜0.01)。聯(lián)合組Ⅳ型膠原的表達低于苯那普利、纈沙坦兩組(P均＜0.05)。 結(jié)論:在單側(cè)腎切除1周后靜脈注射阿霉素誘導的腎小球硬化模型中，ACEI和AT1RA具有相似的腎臟保護作用，聯(lián)合應用優(yōu)于單獨應用。 第二部分:ACEI和AT1RA聯(lián)合應用對腎臟轉(zhuǎn)化生長因子-β1和血小板源性生長因子的影響 目的:探討苯那普利

5、與纈沙坦聯(lián)合應用對腎臟轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)和血小板源性生長因子(PDGF)影響，為延緩腎小球硬化提供可靠的實驗依據(jù)和理論基礎。 方法:動物實驗及分組同上。免疫組化及原位雜交檢測腎臟TGF-β1和PDGF-BB的蛋白和mRNA表達。 結(jié)果:1.TGF-β1的表達在模型組均明顯增加(P＜0.01)，三治療組較模型組明顯減少(P均＜0.01)，聯(lián)合組與苯那普利、纈沙坦兩組之間差異無顯著性意義。2.PDGF-BB的

6、蛋白和mRNA的表達在模型組明顯強于苯那普利組、纈沙坦組及聯(lián)合組(P均＜0.01)，纈沙坦、聯(lián)合組的表達又弱于苯那普利組(P均＜0.05)。 結(jié)論:苯那普利和纈沙坦可能部分通過抑制TGF-β1和PDGF-BB在腎臟中的表達來發(fā)揮延緩腎小球硬化的作用。聯(lián)合應用對PDGF-BB的抑制強于苯那普利組，但對TGF-β1的表達和單獨治療組相似。 第三部分:ACEI和AT1RA聯(lián)合應用對腎小球系膜外基質(zhì)降解系統(tǒng)的影響 目的:

7、探討苯那普利與纈沙坦聯(lián)合應用對腎小球降解系統(tǒng)的影響，為延緩腎小球硬化提供可靠的實驗依據(jù)和理論基礎。 方法:動物實驗及分組同上。免疫組化及原位雜交檢測腎臟纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)和金屬蛋白酶組織抑制因子-1(TIMP-1)的表達。 結(jié)果:1.免疫組化結(jié)果顯示三治療組PAI-1、MMP-9和TIMP-1在腎臟表達較模型組明顯減少(P均＜0.01)，其中PAI-1在聯(lián)合組的表達弱

8、于苯那普利、纈沙坦兩組(P均＜0.05)，MMP-9和TIMP-1分別在聯(lián)合組的表達弱于苯那普利和纈沙坦組(P均＜0.05)。2.原位雜交結(jié)果顯示對照組PAI-1和TIMP-1的mRNA主要在腎小管少量表達，模型組的表達量顯著增加，三治療組PAI-1和TIMP-1mRNA的表達明顯減少，且聯(lián)合組的表達顯著性低于苯那普利、纈沙坦兩組(P均＜0.05)。3.相關性分析PAI-1、TIMP-1吸光光度值與Ⅳ型膠原、腎小球硬化指數(shù)及TGF-β1

9、均呈正相關。 結(jié)論:在單側(cè)腎切除+阿霉素注射誘導的腎小球硬化大鼠模型中，ACEI與AT1RA通過阻斷RAS，降低PAI-1、MMP-9、TIMP-1在腎臟的表達，促進ECM的降解而延緩腎小球硬化的進展，且聯(lián)合應用優(yōu)于單用。 第四部分:ACEI和AT1RA聯(lián)合應用對腎臟細胞凋亡的影響 目的:探討ACEI和AT1RA聯(lián)合應用對腎臟細胞凋亡的影響。 方法:動物實驗及分組同上。免疫組化法檢測腎臟Fas和FasL的

10、表達，TUNEL法檢測腎臟細胞凋亡情況。 結(jié)果:1.光鏡下半定量分析表明苯那普利、纈沙坦、聯(lián)合組Fas和FasL的表達弱于模型組(P均＜0.01)，尤以聯(lián)合組明顯。2.TUNEL法結(jié)果表明模型組腎小球及腎小管細胞凋亡最明顯。與模型組相比，苯那普利、纈沙坦、聯(lián)合組腎小球及腎小管細胞凋亡指數(shù)顯著降低(P均＜0.01)，而聯(lián)合組又低與苯那普利、纈沙坦兩組(P均＜0.05)。3.腎小球硬化指數(shù)與腎小球細胞凋亡指數(shù)、腎小管細胞凋亡指數(shù)均成

11、正相關 結(jié)論ACEI和AT1RA可能部分通過抑制腎臟細胞凋亡來發(fā)揮延緩腎小球硬化的作用，聯(lián)合應用ACEI和AT1RA比單獨應用對細胞凋亡的作用更佳。 第五部分:ACEI和AT1RA聯(lián)合應用對腎臟細胞周期調(diào)控的影響 目的:探討苯那普利和纈沙坦聯(lián)合應用對腎臟細胞周期調(diào)控的影響 方法:動物實驗及分組同上。免疫組化法檢測腎臟周期素D1和P27的表達。 結(jié)果:1.免疫組化染色顯示周期素D1在對照組有少量表達

12、，模型組表達最多，苯那普利、纈沙坦、聯(lián)合組較模型組明顯減少(P均＜0.01)，而聯(lián)合組與苯那普利、纈沙坦組之間無差異(P均＞0.05)。2.P27在對照組最高，模型組最低，苯那普利、纈沙坦、聯(lián)合組較模型組明顯增高(P均＜0.01)，而聯(lián)合組又高于苯那普利、纈沙坦兩組(P均＜0.05)。3.P27與腎小球、腎小管細胞凋亡指數(shù)及周期素D1均呈負相關。 結(jié)論:苯那普利和纈沙坦也通過細胞周期調(diào)控來延緩腎小球硬化，聯(lián)合應用對P27比單獨應