肝衰竭患者血清多肽指紋圖譜的檢測及其臨床意義.pdf

1、目的: 本研究應(yīng)用液體蛋白芯片飛行時間質(zhì)譜技術(shù)檢測乙型肝炎病毒(HBV)相關(guān)性肝炎及肝衰竭患者血清多肽指紋圖譜，初步探討與肝衰竭相關(guān)的血清候選標(biāo)志物，為臨床救治肝衰竭病人提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 方法: 采用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(Matrix Assisted Laser DesorptionIonization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF-M

2、S)聯(lián)合液體蛋白芯片(磁珠)技術(shù)檢測51例肝衰竭(建模組)及25例慢性肝炎(建模組)患者血清，獲得相應(yīng)的弱陽離子交換芯片(weak cationic exchanger，WCX)多肽表達(dá)圖譜(檢測范圍為相對分子質(zhì)量位于800—10000Da之間的血清多肽指紋圖譜)，同時結(jié)合Flex Analysis3.0和ClinProTools2.1數(shù)據(jù)軟件尋找差異多肽峰，并建立相應(yīng)的肝衰竭和慢性肝炎的疾病診斷模型，以此模型盲法篩選另外25例肝衰竭(

3、驗(yàn)證組)和8例肝炎(驗(yàn)證組)患者，評價該診斷模型的準(zhǔn)確度和識別率。同時尋找慢加急性肝衰竭與慢性肝衰竭組血清差異多肽峰，建立診斷模型，并對該模型進(jìn)行盲法驗(yàn)證。 結(jié)果: 51例肝衰竭(建模標(biāo)本)與25例慢性肝炎(建模標(biāo)本)患者血清多肽指紋圖譜經(jīng)FlexAnalysis3.0和ClinProTools2.1數(shù)據(jù)軟件分析后，在質(zhì)荷比為800—10000范圍內(nèi)共檢測出87個多肽峰，其中61個多肽峰在兩組中有顯著差別(P<0.01)

4、。經(jīng)遺傳算法處理后，建立了由5個差異多肽峰組成的肝衰竭和慢性肝炎的疾病診斷模型，5個多肽的質(zhì)荷比(m/z)分別為1944.43、4942.04、4963.59、7765.36、9289.21，其中4942.04、4963.59兩個多肽峰在肝衰竭患者中高表達(dá)，其余低表達(dá)。用另外25例肝衰竭和8例肝炎對照患者盲法驗(yàn)證由以上建模多肽峰建立的診斷模型，結(jié)果25例肝衰竭中24例被正確劃分，正確率為96％，8例肝炎對照中8例全被正確劃分，正確率為1

5、00％，建立的診斷模型顯示了較好的區(qū)分能力，其識別率可達(dá)97.41％。慢加急性肝衰竭組與慢性肝衰竭組相比，共發(fā)現(xiàn)4個(m/z分別為3140.91、2560.5、2941.96、2739.59)差異顯著表達(dá)的Clinprot多肽峰(P<0.05)，其中2941.96多肽峰在慢加急性肝衰竭患者血清中低表達(dá)，其余3個高表達(dá)。經(jīng)遺傳算法軟件分析后，建立了由5個多肽峰(m/z分別為9288.97、2925.57、4679.56、1518.39、2

6、899.12)組成的慢加急性肝衰竭和慢性肝衰竭的疾病診斷模型，并用另外13例慢加急性肝衰竭患者、12例慢性肝衰竭樣本對以上診斷模型進(jìn)行了盲法驗(yàn)證。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)10例慢加急性肝衰竭被正確劃分，正確率為77％，9例慢性肝衰竭被正確劃分，正確率為75％，該診斷模型識別率為88.15％。 結(jié)論: 用液體芯片飛行時間質(zhì)譜技術(shù)分析乙肝相關(guān)性肝衰竭和慢性肝炎患者的血清多肽圖譜，發(fā)現(xiàn)由5個表達(dá)差異多肽峰組成的診斷模型可以有效區(qū)分肝衰竭與