HSPA1A和HSPA8在分娩中的功能研究.pdf

1、參與分娩啟動(dòng)的機(jī)制和因素有很多，包括細(xì)胞凋亡、免疫炎癥調(diào)控因子和激素。然而，具體的作用機(jī)制尚不清楚。HSP70蛋白是熱休克蛋白家族中最重要的成員之一，有多種生物學(xué)功能。有報(bào)道稱HSP70直接或間接參與細(xì)胞凋亡，免疫炎癥反應(yīng)和激素刺激響應(yīng)。
　　為了探索HSP70參與分娩啟動(dòng)的分子機(jī)制，我們通過轉(zhuǎn)染HSP70家族兩個(gè)代表性基因(HSPA1A和HSPA8)的人重組質(zhì)粒和其si-RNA于人羊膜上皮細(xì)胞(WISH細(xì)胞)，過表達(dá)和敲低兩個(gè)基

2、因。然后通過Western blot和RT-PCR分析，檢測(cè)幾個(gè)通路的標(biāo)志基因表達(dá)變化(細(xì)胞凋亡:BAX、 BCL2和FAS;免疫炎癥反應(yīng):TLR4、TAP1和IL-8;雌激素刺激響應(yīng):ESR2)。結(jié)果表明在WISH細(xì)胞中，HSPA1A和HSPA8的過表達(dá)下調(diào)BAX、 FAS、BAG2和 ESR2，上調(diào)BCL2、TLR4、TAP1、CHIP和IL-8; HSPA1A和HSPA8表達(dá)的敲低上調(diào)BAX、 FAS、BAG2和 ESR2，下調(diào)B

3、CL2、TLR4、TAP1、CHIP和IL-8。初步表明了HSPA1A和HSPA8有抗細(xì)胞凋亡的性質(zhì)，并且參與免疫炎癥反應(yīng)以及雌激素信號(hào)通路。也即HSPA1A和HSPA8可能通過細(xì)胞凋亡、免疫炎癥反應(yīng)和雌激素刺激響應(yīng)參與分娩。另外，定量和Western blot的結(jié)果表明，基因表達(dá)水平變化最劇烈的是IL-8和ESR2。然后，通過使用ERK1/2磷酸化特異性抑制劑--PD98，059，處理WISH細(xì)胞，以及通過ELISA分析雌二醇(E2)

4、的變化情況。結(jié)果表明，HSPA1A和HSPA8可以通過抑制ERK1/2的磷酸化調(diào)控ESR2的表達(dá)，進(jìn)而影響雌激素刺激的響應(yīng)。
　　最后，通過對(duì)妊娠15天的孕鼠腹腔注射LPS，構(gòu)建早產(chǎn)鼠模型。用HSPA1A的特異性抑制劑--PFT-μ處理LPS誘導(dǎo)的早產(chǎn)鼠模型，取小鼠胎膜進(jìn)行免疫組化。結(jié)果表明，當(dāng)僅用PFT-μ處理孕鼠時(shí)，IL-8的表達(dá)下降而ESR2的表達(dá)上升;當(dāng)用PFT-μ處理LPS誘導(dǎo)的早產(chǎn)鼠模型時(shí)，IL-8的表達(dá)上升而ESR2

5、的表達(dá)下降。也即，HSPA1A的抑制可通過減少IL-8的表達(dá)和增加ESR2的表達(dá)抑制早產(chǎn)的發(fā)生。且以上所有體內(nèi)試驗(yàn)的結(jié)果和體外細(xì)胞試驗(yàn)的結(jié)果一致，這進(jìn)一步證明了HSPA1A和HSPA8在分娩中的作用。
　　總之，HSPA1A和HSPA8可以通過刺激免疫炎癥反應(yīng)和促進(jìn)雌激素的刺激響應(yīng)來誘導(dǎo)分娩啟動(dòng)。也即，在分娩期間，HSPA1A和HSPA8超表達(dá)時(shí)，HSPA1A和HSPA8可以通過刺激免疫炎癥反應(yīng)，促進(jìn)雌激素的刺激響應(yīng)，誘導(dǎo)分娩。H