零流電位法研究生物分子間相互作用及藥物含量的測定.pdf

1、從分子水平上闡述物質(zhì)間的相互作用，特別是金屬離子、藥物分子等與生物分子間的特異性結(jié)合，是當(dāng)前藥物化學(xué)、生命科學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等許多領(lǐng)域的熱門研究課題。伏安法是常用的研究分子間作用的電化學(xué)手段之一，但是當(dāng)物質(zhì)本身沒有電化學(xué)活性或是相互作用的兩物質(zhì)氧化還原峰發(fā)生重疊時，伏安法的應(yīng)用受到限制。零流電位法是通過監(jiān)測作用過程中界面電位的變化情況來研究兩種物質(zhì)的相互作用，故可有效避免這兩方面因素的約束。
　　本論文以零流電位法作為研究方法，分別考

2、察了多價態(tài)金屬離子與氨基酸相互作用的熱力學(xué)；生物大分子蛋白質(zhì)與藥物小分子相互作用的動力學(xué)與熱力學(xué)；藥物小分子含量測定的應(yīng)用。論文具體包括以下內(nèi)容：
　　（1）用零流電位法分別研究了 Cu2+和Cu+與甘氨酸（Glycine，Gly）的配位反應(yīng)，基于銅的電化學(xué)活性，在銅絲表面施加不同電位范圍的線性掃描電位Eapp，從而選擇性地電生出Cun+（Cu2+或Cu+），并與溶液中的Gly發(fā)生配位反應(yīng)，引起Cu/Cun+/Gly界面電位的變化

3、。通過記錄相應(yīng) I-Eapp曲線的移動以及零流電位值（Zero current potential,Ezcp）隨Gly濃度的變化，推導(dǎo)了Ezcp~logc(Gly)之間的關(guān)系，實(shí)現(xiàn)了Cu2+-Gly和Cu+-Gly配位反應(yīng)配合物穩(wěn)定常數(shù)的測定。結(jié)果表明在導(dǎo)線表面電生金屬離子并結(jié)合零流電位法可用來研究溶液中不穩(wěn)定金屬離子的配位平衡，顯示出該方法在多價態(tài)金屬離子配位平衡研究方面的優(yōu)勢。
　?。?）將牛血清白蛋白（Bovine seru

4、m albumin，BSA）固定于碳棒導(dǎo)電材料（Carbon conducting material，CMC）表面，并置于含有吲哚美辛（Indomethacin，INM）的磷酸鹽緩沖溶液中，通過測量I-Eapp曲線和零流電位值Ezcp隨時間的變化，實(shí)現(xiàn)了對INM-BSA反應(yīng)動力學(xué)的監(jiān)測；記錄I-Eapp曲線和零流電位值Ezcp隨INM濃度的變化，測定了反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)；并應(yīng)用該方法測定藥品中INM的含量。結(jié)果表明，INM與BSA相互作用

5、的過程符合蘭繆爾單分子層結(jié)合，表觀結(jié)合速率常數(shù)ka為1.16×106(mol·l-1)-1·s-1；同等條件下，INM濃度在0~5.76×10-7mol·l-1范圍內(nèi)，與BSA的結(jié)合比m（INM:BSA）為1:1，結(jié)合常數(shù)β為1.70×106l·mol-1；該方法用于INM定量測量時，檢測限為5.04×10-8mol·l-1，吲哚美辛腸溶片中INM含量測定結(jié)果與紫外測定結(jié)果一致。
　?。?）將BSA固定于CMC表面，并置于含有美洛

6、昔康（Meloxicam，MLX）的磷酸鹽緩沖溶液中，通過測量I-Eapp曲線和零流電位值Ezcp隨時間的變化，實(shí)現(xiàn)了對MLX-BSA反應(yīng)動力學(xué)的監(jiān)測；記錄I-Eapp曲線和零流電位值Ezcp隨MLX濃度的變化，測定了反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)；并應(yīng)用該方法測定了藥品中MLX的含量。結(jié)果表明，MLX與BSA相互作用的過程符合蘭繆爾單分子層結(jié)合，表觀結(jié)合速率常數(shù)ka為1.64×106(mol·l-1)-1·s-1；同等條件下，MLX濃度在0~5.0

7、4×10-7mol·l-1范圍內(nèi)，與BSA的結(jié)合比m（MLX:BSA）為1:1，結(jié)合常數(shù)β為3.71×105l·mol-1；該方法用于MLX定量測量時，檢測限為2.16×10-8mol·l-1，美洛昔康藥劑中MLX含量檢測結(jié)果與紫外測定結(jié)果一致。
　?。?）用零流電位法測定拉米夫定（Lamivudine，LAM）的含量。以CMC為導(dǎo)電材料，將其置于磷酸鹽緩沖溶液中，通過測定零流電位值Ezcp隨LAM濃度的變化，得到Ezcp~?lo