氟斑牙與CLCN7基因多態(tài)性相關(guān)性的研究.pdf

1、地方性氟中毒(endemicfluorosis)是一種常見(jiàn)的環(huán)境地球化學(xué)性地方病,該病主要侵犯骨骼(氟骨癥)、牙齒(氟斑牙),以往研究認(rèn)為是由于長(zhǎng)期生活在高氟環(huán)境中攝入過(guò)量的氟而導(dǎo)致。本課題組近年著重于研究陜西省氟斑牙流行病學(xué)的發(fā)生和機(jī)理,關(guān)注高氟區(qū)常住居民氟斑牙臨床表現(xiàn)、發(fā)病情況及其相關(guān)的基因背景,逐漸發(fā)現(xiàn)氟斑牙致病機(jī)制與氯通道基因相關(guān)?；谠谙嗤叻h(huán)境中的個(gè)體產(chǎn)生不同患病情況的基因背景存在差異,本研究在前期課題組的研究基礎(chǔ)之上,將

2、進(jìn)一步分析氯通道基因與氟斑牙患病率的相關(guān)性,探索氯通道與氟斑牙發(fā)生的關(guān)系。
　　方法:
　　一:采集陜西健康人群血樣132例,提取基因組DNA;應(yīng)用質(zhì)譜基因多態(tài)性分型檢測(cè)技術(shù)(MassArray)對(duì)CLCN7基因的3個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(Singlenucleotidepolymorphisms,SNP)rs11645645、rs2235579、rs2745001進(jìn)行基因分型;并將分型結(jié)果與人類(lèi)單體型基因組數(shù)據(jù)庫(kù)(Hapma

3、p)中中國(guó)漢族人群(HanChineseinBeijing,CHB)、日本人群(JapaneseinTokyo,JPT)、歐洲人群(UtahresidentswithNorthernandWesternEuropeanancestryfromtheCEPHcollection,CEU)的基因分型進(jìn)行比對(duì)。
　　二:針對(duì)高氟區(qū)陜西省安康市紫陽(yáng)縣進(jìn)行樣本采集工作,采集受檢對(duì)象外周血樣本,用磁珠法獲取基因組DNA。結(jié)合課題組前期氟斑牙流

4、行病學(xué)研究樣本,應(yīng)用MassArray方法對(duì)高氟區(qū)樣本做CLCN7基因多態(tài)性位點(diǎn)分型,分析各SNP位點(diǎn)的基因分型在氟斑牙患病組和正常對(duì)照組之間的差異,并將分型結(jié)果與Hapmap中CHB、JPT、CEU的基因分型進(jìn)行比較。
　　三:從受檢樣本中隨機(jī)抽取100份血樣(氟斑牙患者50份,正常對(duì)照50份),獲取這100份血樣的mRNA,針對(duì)CLCN7基因進(jìn)行熒光實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增,以研究目的基因在正常對(duì)照組和病例組之間表達(dá)量的差異。

5、>　　結(jié)果:
　　1.初期調(diào)查的132例健康人群所選位點(diǎn)的基因分型與中國(guó)人群分布一致(P>0.05),但與歐洲人群的分布存在顯著差異(P<0.05)。
　　2.本研究共納入1723份基本資料信息完整的樣本,其中氟斑牙患者889例,對(duì)照組834例;男性909例,女性814例,受檢人群年齡范圍從12到77歲,平均年齡為38歲。實(shí)驗(yàn)樣本rs11645645、rs2235579、rs2745001基因分型在病例組和對(duì)照組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、差異(P>0.05),樣本各位點(diǎn)基因分型與中國(guó)人群分布一致(P>0.05),但與歐洲人群的分布存在顯著差異(P<0.05)。
　　3.熒光實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示:病例組CLCN7基因mRNA水平的相對(duì)表達(dá)量比對(duì)照組降低。
　　結(jié)論:
　　1.本實(shí)驗(yàn)選取的陜西健康人群具有代表性,其CLCN7基因多態(tài)性位點(diǎn)基因分布與數(shù)據(jù)庫(kù)列舉的中國(guó)人群近似;rs11645645、rs2235579、rs2745001位點(diǎn)可作為亞洲人群CL

7、CN7的標(biāo)志SNP位點(diǎn)。
　　2.依據(jù)本研究選取的rs11645645、rs2235579、rs2745001位點(diǎn),尚不能認(rèn)為CLCN7基因多態(tài)性與氟斑牙的發(fā)病存在顯著相關(guān),其原因可能與選擇的多態(tài)性位點(diǎn)有關(guān),rs11645645、rs2745001都是非功能性的SNP位點(diǎn),rs2235579位點(diǎn)的變異可改變CLCN7基因的外顯子剪切增強(qiáng)子(Exonicsplicingenhancer,ESE)的數(shù)量和種類(lèi)。對(duì)氟斑牙與CLCN7基因

8、多態(tài)性的相關(guān)研究還需要對(duì)后續(xù)功能性位點(diǎn)的進(jìn)一步排查。
　　3.氟斑牙患者CLCN7基因在mRNA水平的相對(duì)表達(dá)量比正常對(duì)照組降低,表明氟與ClC-7之間的確存在一定的關(guān)聯(lián),一方面可能是氟離子直接對(duì)ClC-7產(chǎn)生影響,另一方面可能是氟離子通過(guò)某些表觀遺傳調(diào)控機(jī)制調(diào)節(jié)CLCN7基因的表達(dá)。
　　本研究主要針對(duì)陜西省高氟地區(qū)進(jìn)行大樣本流行病學(xué)研究,結(jié)合有關(guān)氟離子與氯通道關(guān)系的研究,探究氟斑牙與CLCN7基因多態(tài)性之間的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)