16Sr RNA基因分子技術(shù)研究仔豬胃腸道菌群區(qū)系變化.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文16SrRNA基因分子技術(shù)研究仔豬胃腸道菌群區(qū)系變化姓名：蘇勇申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)指導(dǎo)教師：朱偉云20071101中文摘要anaerobius，Moraxellacuniculi，Streptococcussuis和PorphyromonascatoniaeRealtimePCR定量分析表明，仔豬斷奶后，前腸中乳酸桿菌和Lsobrius(斷奶前的優(yōu)勢茵)在總細(xì)菌中的比例顯著下降同時(shí)，建立了＆

2、劬特異性realtimePCR，它能夠?qū)ωi腸道復(fù)雜茵群中的&礎(chǔ)進(jìn)行精確定量，最低檢測濃度為每微升核酸樣品lO個(gè)16srRNA基因拷貝數(shù)該分析結(jié)果顯示，斷奶后3天仔豬胃中的&suis數(shù)量達(dá)107數(shù)量級，而在哺乳階段則未能檢測到3仔豬空、回腸食糜與腸壁中細(xì)菌及乳酸桿菌菌群比較利用16SrRNA基因分子方法比較了7日齡至35日齡仔豬空、回腸食糜與腸壁中細(xì)菌及乳酸桿菌菌群差異DGGE分析顯示，哺乳階段仔豬空腸食糜的優(yōu)勢菌Lsobrius也在腸壁

3、茵群中出現(xiàn)，而斷奶后，空腸食糜中新出現(xiàn)的優(yōu)勢茵&suis未在腸壁茵群中出現(xiàn)這一結(jié)果在realtimePCR定量分析中也得到證實(shí)，所有腸壁樣品均為檢測到&su／s比較食糜和腸壁乳酸桿菌茵群DGGE圖譜發(fā)現(xiàn)，一些特殊條帶只在腸壁樣品中存在然而，序列分析顯示與這些條帶最相近的細(xì)茵為alfaproteobacteria(Brevundimonasvesicularis)對乳酸桿茵特異引物(Lab0159)與特殊條帶相關(guān)的細(xì)茵的相應(yīng)序列進(jìn)行比對發(fā)

4、現(xiàn)，它們之間僅有12個(gè)堿基的錯(cuò)配4代表性差異分析比較兩株來自不同地區(qū)的豬源Lsobrius菌株代表性差異分析技術(shù)近來被引入用于比較高相似性茵株之間的基因組差異，該技術(shù)能夠在菌株水平對兩株細(xì)菌基因組進(jìn)行差異分析利用DGGE和序列分析技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)來自不同地區(qū)的豬源LactobaciUusspS1和Lactobacillussobrius001T菌株的16SrRNA基因全序列有很高相似性，大于99％Lsobrius特異性引物也可以對這兩株茵的

5、16SrRNA基因的特定片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增代表性差異分析顯示，這兩株茵的基因組之間未有差異以上結(jié)果說明，LactobacillusspS1茵株也屬于Lsobrias，并且推測這兩株茵為同一菌株5益生菌LsobriusS1對仔豬后腸菌群的影響結(jié)合PCRDGGE，16SrRNA基因序列分析及定量realtimePCR技術(shù)，研究口服益生茵厶sobriusS1菌株后仔豬從7至35日齡(斷奶后兩周)后腸茵群的變化六窩新生仔豬被隨機(jī)分成兩組：對照組