雞ADFP和PLIN基因與脂肪組織生長發(fā)育關系的遺傳學研究.pdf

1、脂肪性狀是優(yōu)質雞肉品質評價的重要指標，此類性狀的發(fā)育會直接影響其商品性能。因此，有必要開展調控脂肪性狀發(fā)育的基因的研究。Adipocytedifferentiation-relatedprotein(ADFP)和Perilipin是覆蓋在脂滴表面的磷蛋白，對人和鼠脂肪細胞的脂質代謝有重要的調控作用。由于兩種蛋白參與了糖尿病、肥胖癥和動脈粥樣硬化的異常脂質代謝，在國外，ADFP和Perilipin在持續(xù)十七年的時間中一直是研究的熱點。在人

2、和小鼠上開展ADFP和Perilipin的研究對深入研究雞脂肪性狀遺傳機制有很好的借鑒作用。 本研究以地方品種四川山地烏骨雞為試驗材料，克隆獲得了雞PAT家族成員ADFP和基因PLIN的全編碼區(qū)序列(1317bp和1554bp)(GenBankaccessionnumbers：EU620700和EU1620701)，并翻譯獲得其氨基酸序列(438aa和515aa)。通過多種生物信息學分析方法，確定兩條氨基酸序列具有PAT家族的結

3、構特征，是雞PAT家族成員ADFP和PLIN蛋白。 本研究以地方品種四川山地烏骨雞、藏雞和培育優(yōu)質雞“大恒”S01系為試驗材料，采用SYBRgreenⅠ定量PCR分析ADFP基因和PLIN基因在1日齡和84日齡兩個時間點品種間的表達差異，同時分析了四川山地烏骨雞胚胎期(第9天和第15天)、1日齡和84日齡等4個時間點ADFP基因和PLIN基因表達的組織差異，以及胸肌、肝臟、腹脂和皮脂組織中ADFP基因和PLIN基因表達量的發(fā)育性

4、變化同皮脂厚、肌內脂肪含量、活重和冠重等四個表型性狀累積生長值之間的關系。結果表明，ADFP基因和PLIN基因在雞不同生長發(fā)育階段都有表達，并且在不同階段各有優(yōu)勢表達組織，同一組織中也有表達的優(yōu)勢時間點；腹脂組織中ADFP基因的發(fā)育性變化與活重和冠重的累積生長值成顯著正相關(P＜0.05)，胸肌組織中ADFP基因的發(fā)育性變化與肌內脂肪含量的累積生長值成顯著正相關(P＜0.05)；腹脂組織中PLIN基因的發(fā)育性變化與皮脂厚的累積生長值成極

5、顯著地正相關(P＜0.01)，胸肌組織中PLIN基因的發(fā)育性變化與肌內脂肪含量的累積生長值成極顯著地正相關(P＜0.01)。這說明，ADFP和PLIN基因表達量與雞脂肪組織，尤其是肌內脂肪含量的發(fā)育緊密相關。 通過研究四川山地烏骨雞各組織的ADFP和PLIN基因表達量倍比值的發(fā)育性變化，發(fā)現皮脂和腹脂組織中ADFP和PLIN表達量比值變化隨機體的生長發(fā)育呈先升后降的趨勢。由此推測，隨著脂肪組織中脂肪細胞的發(fā)育成熟，ADFP和PL

6、IN基因先后對雞脂肪組織的代謝發(fā)揮主要調控作用。 本研究以地方品種四川山地烏骨雞、廣東惠陽胡須雞、封開杏花雞、清遠麻雞、廣西霞煙雞、四川大恒優(yōu)質雞8個品系、嶺南黃雞矮小型麻羽專門化品系(E2)、嶺南黃雞Ⅱ號配套系(DC)和引進肉雞品種愛拔益加等16個群體，共430個個體為試驗材料，采用PCR-SSCP的方法設計引物，掃描ADFP和PLIN基因外顯子序列和鄰近內含子序列。結果，在ADFP基因中檢測到3個單核苷酸突變位點，分別位于內

7、含子4、內含子5和外顯子8(第398氨基酸殘基處)。具體為Z染色體33394913位(SNP1)A→T，33395676位(SNP2)C→T，33397903位(SNP3)A→G。與dbSNP數據庫的SNP比對分析，發(fā)現三個突變位點為新的突變位點。在ADFP基因的三個突變位點中，等位基因A、C和G依次為SNP1(A/T)、SNP2(C/T)和SNP3(A/G)的優(yōu)勢等位基因。ADFP基因單突變位點與16個群體的屠宰性狀關聯分析結果顯示，

8、SNP3對肌內脂肪含量的遺傳效應達到顯著水平(P＜0.05)。同時，SNP1對全凈膛重、腹脂重和腹脂率的遺傳效應達到顯著水平(P＜0.05)，SNP2對胸肌重、腹脂重和皮脂厚的遺傳效應達到顯著水平(P＜0.05)。單倍型與16個群體的屠宰性狀關聯分析結果顯示，單倍型組合對胸肌重、腹脂重和腹脂率的遺傳效應達到顯著水平(P＜0.05)。這說明ADFP基因突變位點與屠宰性狀，尤其是脂肪性狀顯著相關，該基因可能是影響雞的脂肪性狀的主效基因或與控

9、制這些性狀的QTL連鎖。 在PLIN基因中檢測到3個單核苷酸突變位點，分別位于外顯子2(第7氨基酸殘基)和外顯子7(第285氨基酸殘基和第289氨基酸殘基)。具體為10染色體14521351位(SNPl)T→C，14523391位(SNP2)C→T，14523402位(SNP3)G→A。與dbSNP數據庫的SNP比對分析，發(fā)現三個突變位點為新的突變位點。在PLIN基因的三個突變位點中，SNP1(T/C)和SNP2(C/T)各基因

10、型和等位基因在16個群體中隨機分布，沒有明顯的優(yōu)勢基因型和等位基因；SNP3(G/A)基因型GG和等位基因G在16個群體中均為優(yōu)勢基因型和等位基因。突變位點SNP1和SNP2具有中等的多態(tài)信息含量。單突變位點與16個群體的屠宰性狀關聯分析結果顯示，SNP1、SNP2和SNP3分別對肌內脂肪含量、胸肌重和屠體重有顯著地遺傳效應(P＜0.05)。單倍型與16個群體的屠宰性狀關聯分析結果顯示，單倍型組合對皮脂厚有顯著的遺傳效應(P＜0.05)