HPLC-ELSD法研究鹽酸甜菜堿在大鼠體內的藥物代謝動力學.pdf

1、甜菜堿廣泛存在于動植物和微生物體內，作為甲基供體參與蛋氨酸循環(huán)，能明顯改善機體因缺少甲基所致的多種癥狀，可用于治療高同型半胱氨酸綜合征，并能保肝護腎、保持心臟與血管健康，此外還有抑制腫瘤、保護細胞抵抗高滲等諸多藥理作用。研究甜菜堿的藥物代謝動力學，可以闡明甜菜堿在體內的動態(tài)變化規(guī)律，為藥效研究提供重要的理論參數(shù)，并為甜菜堿相關新藥和保健品的開發(fā)提供理論依據(jù)。 第一部分生物樣品中鹽酸甜菜堿的HPLC-ELSD測定法 目的：

2、根據(jù)甜菜堿的結構特點，建立大鼠血清、排泄物和各種組織中甜菜堿的HPLC-ELSD分析方法。 方法：（1）色譜柱采用大連依利特Hypersil胺基色譜柱（250×4.6mm，5μm），流動相為乙腈-水-三乙胺（85：15：0.08），流速為1.0ml·min-1。檢測器采用美國Alltech ELSD2000型蒸發(fā)光散射檢測器，漂移管溫度為86.0℃，載氣流速為2.2L·min-1。（2）生物樣品處理的基本方法：取100μl樣品，

3、加入900μl甲醇進行萃取和去蛋白，0.22μm和，微孔濾膜過濾，90℃水浴揮干，固體殘留物用150μl流動相溶解，20μl進樣。 結果：各生物樣品的線性范圍較寬（其中血清為0.5052～19.8588μg），回歸方程的r值為0.9977～0.9999，該分析方法檢測限為0.03μg，最低定量限為0.11μg，高、中、低三種不同濃度進樣精密度實驗的RSD值分別為1.74%，1.64%，0.50%，重復性實驗的RSD值分別為1.7

4、6%，3.31%，6.32%，準確度分別為98.57%、104.97%、83.20%，提取回收率分別為93.98%、91.40%、80.59%，樣品日內穩(wěn)定性RSD為5.69～7.87%，日間穩(wěn)定性RSD為3.77～6.40%。 結論：建立了測定大鼠體內各種生物樣品甜菜堿含量的HPLC-ELSD分析方法，該法靈敏度高，專屬性強，能夠滿足甜菜堿藥動學研究的需要。 第二部分鹽酸甜菜堿在大鼠體內的藥物代謝動力學研究 目

5、的：研究大鼠在尾靜脈注射和灌胃給藥后兩種劑量的鹽酸甜菜堿在體內的藥代動力學特征，獲得可靠的藥動學參數(shù)。 方法：（1）Wistar大鼠20只，隨機分為2組，每組10只。其中一組灌胃單次給鹽酸甜菜堿450mg·kg－1或112.5 mg·kg-1，于給藥前和給藥后10min、30 min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、18h、24h于尾尖取血約0.5ml。另外一組尾靜脈單次給鹽酸甜菜堿450mg·kg－1或1

6、12.5 mg·kg－1，于給藥前和給藥后5 min、15 min、30 min、45min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h于尾尖取血約0.5ml。測定甜菜堿含量（Xa+X0），對應扣除內源性甜菜堿含量X0，記錄去底血清甜菜堿含量Xa。（2）采用3P97藥動學軟件進行自動擬合處理，以最佳房室模型為標準分別計算每只大鼠的主要藥代動力學參數(shù)并求出均值，利用統(tǒng)計矩法求算AUC及MRT值，并求算各劑量的絕對生物利用

7、度。 結果：大鼠灌胃兩個劑量的鹽酸甜菜堿后藥動學行為符合一室開放模型，而靜脈注射高、低兩個劑量的鹽酸甜菜堿后藥動學行為符合三室開放模型。主要藥動學參數(shù)為：（1）ig.450mg·kg-1組：t1/2（ka）=1.14h，t1/2（ke）=4.34h，T（peak）=2.69h，MRT（0～t）=7.06h，CL/F（s）=0.371L·kg－1·h－1，V/F（c）=2.257L·kg－1；（2）ig.112.5mg·kg-1組

8、：t1/2（ka）=0.84h，t1/2（ke）=4.39h，T（peak）=1.80h，CL/F（s）=0.193L·kg－1·h－1，V/F（c）=1.229L·kg－1，MRT（0～t）=6.49h；（3）iv.450mg·kg-1組：t1/2 pi=0.18h，t1/2 alpha=1.30h，t1/2 beta=13.77h，Vc=0.198 L·kg－1·h－1，CL（s）=0.182L·kg－1·h－1，MRT（0～t）=

9、3.10h；（4）iv.112.5 mg·kg-1組：t1/2 pi=0.25h，t1/2 alpha=1.03h，t1/2beta=5.48h，Vc=0.326L·kg-1.h－1，CL（s）=0.181L·kg－1·h-1，MRT（0～t）=3.65h。 結論：大鼠灌胃給BTH后，吸收較快，血藥濃度約2h達峰，此后緩慢消除，t1/2（ke）約為4.3h，MRT（0～t）約為7h；大鼠尾靜脈注射給BTH后，起始階段血藥濃度下降

10、迅速，第一分布相半衰期t1/2 pi約為0.2h，第二分布相半衰期t1/2alpha約為1.2h，分布較快，此后緩慢消除，高劑量組的消除半衰期t1/2 beta明顯高于低劑量組。 第三部分鹽酸甜菜堿在大鼠體內的組織分布研究 目的：測定大鼠各主要組織的甜菜堿含量，研究大鼠在給藥前和高劑量達峰時間的藥物組織分布特點。 方法：（1）大鼠內源性甜菜堿組織分布測定：Wistar大鼠7只，斷頭處死，取各主要組織，測定內源性甜

11、菜堿含量X0。（2）Wistar大鼠10只，按照450mg·kg-1的劑量灌胃給藥，2h后斷頭處死，取各主要組織，測定甜菜堿含量（Xa+X0）。 結果：內源性甜菜堿在心、肺、肝、脾、腎、睪丸、腸中均可以檢測到，其中肝、腎、睪丸中的含量較高；在給大鼠ig.450mg·kg－1鹽酸甜菜堿兩小時后，肌肉和脂肪中依然未檢出甜菜堿，睪丸中的含量沒有明顯變化，腦、心臟、肺、脾和小腸中含量快速提高，并在肝、腎濃集。 結論：內源性甜菜堿

12、主要集中在肝、腎、睪丸中，給藥后甜菜堿則向肝、腎、小腸濃集。 第四部分鹽酸甜菜堿在大鼠體內的排泄研究 目的：測定大鼠在給藥前和給藥后尿液和糞便中Bet的含量，說明排泄和代謝途徑的主次和比例關系。 方法：Wistar大鼠10只置代謝籠，按照450mg·kg-1的劑量灌胃給藥，收集給藥前24h及給藥后24h的尿液與糞便，測定內源性甜菜堿排泄量及給藥后的藥物排泄量。 結果：大鼠在給藥后24h由尿液排泄的的甜菜堿