建立真核細胞蛋白質(zhì)組合翻譯后修飾的質(zhì)譜分析方法.pdf

1、真核細胞內(nèi)源性蛋白質(zhì)翻譯后修飾與眾多重大疾病相關(guān)聯(lián)因而一直備受關(guān)注。破解藥物靶標的翻譯后修飾密碼為藥物設(shè)計開辟了新的思路。翻譯后修飾使蛋白的結(jié)構(gòu)變得更加復雜，功能更加多樣，調(diào)節(jié)更加細化，作用更加特異。通過系統(tǒng)鑒定與疾病相關(guān)的靶標蛋白中翻譯后修飾類型及其修飾位點，比較病理狀態(tài)下靶標蛋白翻譯后修飾水平與正常狀態(tài)中蛋白修飾水平的差異，檢測藥物處理后靶標蛋白翻譯后修飾水平的變化，或許能從另一角度更深入透徹的理解疾病致病機理，促進藥物研發(fā)。然而對

2、翻譯后修飾的確定一直存在諸多困難。伴隨生物質(zhì)譜技術(shù)的不斷完善，它逐漸成為蛋白質(zhì)翻譯后修飾鑒定的最有力的方法之一。微管蛋白是抗癌類藥物的一種重要靶標蛋白，與其相關(guān)的藥物很多，最具代表性的是紫杉醇，它具有聚合和穩(wěn)定細胞內(nèi)微管的作用。
　　本研究以我們把人源細胞系中表達的微管蛋白作為研究對象，依托WatersSNAPT HDMS系統(tǒng)對其多種翻譯后修飾進行系統(tǒng)鑒定。通過對樣品前處理過程的改進，對后續(xù)色譜質(zhì)譜檢測參數(shù)的優(yōu)化，對所獲的質(zhì)譜分析

3、數(shù)據(jù)的可信度驗證篩選原則的完善，建立了一套適用于真核細胞內(nèi)源性蛋白翻譯后修飾鑒定的最優(yōu)化分析流程。利用這套建立的真核蛋白翻譯后修飾質(zhì)譜分析流程，我們對模式蛋白的多種翻譯后修飾進行了最系統(tǒng)全面準確的鑒定。在完善翻譯后修飾位點鑒定流程的基礎(chǔ)上，我們進一步探索建立非標記和標記定量蛋白質(zhì)組學方法，以期對蛋白翻譯后修飾水平進行相對定量比較。
　　總體來說，我們建立了一整套用于真核細胞內(nèi)源性蛋白翻譯后修飾類型和修飾位點鑒定、修飾水平監(jiān)測的分析