IL-18，Il-33對(duì)Th1,Th2細(xì)胞因子的表達(dá)調(diào)控在原發(fā)免疫性血小板減少癥發(fā)病中的作用.pdf

1、第一部分細(xì)胞因子定量蛋白芯片技術(shù)分析原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)患者血清細(xì)胞因子水平
　　研究目的和背景:原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)是一個(gè)以自身免疫為主的疾病:主要特征為抗體介導(dǎo)的血小板破壞，巨核細(xì)胞血小板生成不足，T細(xì)胞功能失調(diào)等。我們研究的主要目的是對(duì)ITP患者血清的細(xì)胞因子水平做全面的評(píng)估和檢測(cè)，并且就ITP不同病程如初發(fā)、緩解、復(fù)發(fā)的情況跟蹤細(xì)胞因子的變化。
　　材料和方法:我們的標(biāo)本來(lái)自10位健康人作為對(duì)

2、照（作為“Control”組），共23位ITP患者，其中17位未經(jīng)治療前（作為“New ITP”組），這17位患者經(jīng)過(guò)地塞米松治療后均獲得完全緩解（作為“Response”組），這17位患者中的4位患者與另外6位患者治療緩解后復(fù)發(fā)（作為“Relapse”組）。應(yīng)用細(xì)胞因子定量蛋白芯片ELISA技術(shù)檢測(cè)血清中各細(xì)胞因子的水平。
　　結(jié)果:與正常人相比，Th2相關(guān)的細(xì)胞因子IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等在初發(fā)和復(fù)發(fā)的IT

3、P患者中顯著降低，而Thl相關(guān)的細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α顯著降低而IL-2在ITP患者中沒(méi)有明顯變化。經(jīng)過(guò)地塞米松治療緩解后，Th1相關(guān)細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、 TNF-α和Th2相關(guān)細(xì)胞因子IL-5、IL-6、IL-10，均不同程度地較患者各自治療前的水平明顯上升。
　　結(jié)論:我們細(xì)胞因子定量蛋白芯片結(jié)果顯示:初發(fā)ITP患者的Th1相關(guān)細(xì)胞因子顯著降低，Th2相關(guān)細(xì)胞因子也顯著降低。經(jīng)過(guò)治療后完全緩解的ITP患者Th

4、1、Th2相關(guān)細(xì)胞因子較治療前均有不同程度的回升。
　　第二部分 IL-18，IL-33通過(guò)T-bet，GATA3調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞功能和細(xì)胞因子的分泌在原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)發(fā)病中的作用
　　研究目的和背景:為了檢測(cè)Th1，Th2失衡在原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)當(dāng)中的作用，我們進(jìn)行了CD4+T細(xì)胞的體外培養(yǎng)，觀察其在ITP患者中功能的改變以及地塞米松治療后的變化;以及探索白介素-18(IL-18)和白介素-

5、33（IL-33）的功能和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在ITP發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　材料和方法:我們采集了共15個(gè)樣本來(lái)自5位健康人作為對(duì)照（作為“Control”組），采集了9個(gè)樣本來(lái)自3位初發(fā)ITP患者（作為“New ITP”組），而另外采集了9個(gè)樣本來(lái)自于3位經(jīng)過(guò)地塞米松治療后完全緩解的患者（作為“Response”組），每位受試者分別采集三個(gè)樣本。將其外周血進(jìn)行分離，磁珠分選純化后，培養(yǎng)CD4+T細(xì)胞，每個(gè)受試者的三個(gè)樣本隨機(jī)分組，分別給予

6、10ng/mL的IL-18、100ng/mL的IL-33和不加刺激的不同條件下培養(yǎng)4天。在第0、1、4天搜集細(xì)胞，并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其CD4，IL-13，T-bet，GATA3等指標(biāo)。細(xì)胞的mRNA采集自第0、1、3、4天，運(yùn)用qRT-PCR的方法檢測(cè)E4BP4，IL-5，IL-10，IL-18Ra，GATA3，ST2L，和T-bet的值。于第0、1、3、4天搜集細(xì)胞培養(yǎng)的上清液并且用流式細(xì)胞珠子陣列分析(CBA)方法檢測(cè)IL-5，IL

7、-10，IL-13，TNF-α，和IFN-γ的水平。
　　結(jié)果:體外CD4+T細(xì)胞培養(yǎng)研究顯示初發(fā)和緩解ITP患者在研究各時(shí)點(diǎn)均有細(xì)胞內(nèi)流式T-bet水平的高表達(dá)，IL-13和GATA3在第0和第1天時(shí)高表達(dá)，但第4天時(shí)低表達(dá)。細(xì)胞內(nèi)mRNA的E4BP4，T-bet，IL-10的表達(dá)有明顯升高，同樣也觀察到了緩解組中IL-10，GATA3，ST2L的明顯升高。初發(fā)和緩解ITP患者，細(xì)胞外CBA檢測(cè)IL-5，IL-10，IL-13，

8、TNF-α和IFN-γ的水平在各個(gè)時(shí)點(diǎn)與正常對(duì)照相比均明顯減低。而對(duì)于加入IL-18，IL-33或不加刺激的各組，上述的細(xì)胞內(nèi)流式檢測(cè)、mRNA、細(xì)胞外游離細(xì)胞因子均沒(méi)有顯著性差異?？傮w上經(jīng)過(guò)地塞米松治療緩解的患者在細(xì)胞因子的表達(dá)和分泌的過(guò)程中與初發(fā)ITP患者相比沒(méi)有顯著性差異。
　　結(jié)論:ITP患者Th1、Th2相關(guān)細(xì)胞外游離細(xì)胞因子IL-5、IL-10、IL-13、TNF-α、IFN-γ濃度降低與定量蛋白芯片的結(jié)果相吻合;IT

9、P患者細(xì)胞內(nèi)Th1相關(guān)細(xì)胞因子T-bet高表達(dá)，細(xì)胞內(nèi)Th2相關(guān)細(xì)胞因子GATA3與IL-13表達(dá)在培養(yǎng)早期升高培養(yǎng)后期減低，為我們揭示了ITP發(fā)病可能存在新的原因:即Th1/Th2相關(guān)細(xì)胞因子可能在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控、翻譯后調(diào)控和蛋白表達(dá)分泌等多層次多級(jí)別有調(diào)控。體外培養(yǎng)經(jīng)過(guò)IL-18和IL-33的刺激并未觀察到健康人或ITP患者的CD4+T細(xì)胞功能對(duì)于其刺激的顯著性差異，我們認(rèn)為和IL-18，IL-33主要在Th0細(xì)胞分化前期而非已經(jīng)定向分