家族性胃癌及胃癌家族遺傳性與E-cadherin基因的研究.pdf

1、基因突變和其啟動(dòng)子甲基化是使基因轉(zhuǎn)錄靜止甚至整個(gè)基因失活的主要原因之一，在癌癥的發(fā)生和發(fā)展過程中起重要作用。10％的胃癌表現(xiàn)為家族聚集性胃癌，家族聚集性胃癌可由強(qiáng)遺傳易感性基因(例如E-cadherin基因)引起；胃癌的家族聚集性也可是弱遺傳易感性基因共同作用并在某些環(huán)境因素作用下經(jīng)過漫長過程所產(chǎn)生的一個(gè)總效應(yīng)。E-cadherin基因作為轉(zhuǎn)移抑制因子在胃癌的發(fā)展過程中起著重要的作用，其基因一旦突變遺傳給后代，就會(huì)大大增加后代患腫瘤的危

2、險(xiǎn)性。家族性胃癌遺傳易感基因的研究被認(rèn)為是未來十年胃癌最有潛力的研究項(xiàng)目。NCCN2008胃癌治療指南明確指出：25％的常染色體顯性遺傳性彌漫型胃癌易感家族存在上皮鈣粘素(E-cadherin)突變，對具有遺傳性彌漫型胃癌家族史并攜帶胚系E-cadherin的截?cái)嗤蛔兊臒o癥狀年輕患者提供遺傳咨詢和實(shí)施預(yù)防性胃切除術(shù)，可以有所裨益。E-cadherin基因胚源性突變在世界很多地方都有的報(bào)道，但即使是在符合標(biāo)準(zhǔn)的HDGC家族中E-cadhe

3、rin突變檢出率僅為25％-36％，仍然有60％以上家系遺傳易感基因未被發(fā)現(xiàn)，家族性腸性胃癌的遺傳易感基因尚未發(fā)現(xiàn)。在我國，尚無明確資料證實(shí)胃癌和家族性胃癌的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)：與E-cadherin基因的表達(dá)、甲基化及突變的關(guān)系也尚無系統(tǒng)研究；是否存在其他相關(guān)基因及與HNGC和FIGC多效易感基因需進(jìn)一步探討；故進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)和篩選家族性胃癌易感基因任重道遠(yuǎn)。胃癌是我國頭號(hào)腫瘤殺手，我圖人口眾多，是胃癌的高發(fā)地區(qū)，胃癌是早期發(fā)現(xiàn)后能夠治愈的疾

4、病，所以確定與胃癌易感性相關(guān)的基因，將在確定易感人群，早期診斷，早期治療上具有非常重要的作用。
　　 第一部分我國家族性胃癌家系的臨床病理特點(diǎn)及相關(guān)腫瘤分析
　　 目的：研究我國南方家族性胃癌的家系發(fā)病特點(diǎn)和預(yù)后，及其家系中發(fā)生相關(guān)腫瘤的特點(diǎn)，探討我國家族性胃癌的診斷和篩選方法。
　　 方法：該院胃腸胰外科單病種胃癌資料庫中自1994年6月至2007年10月共有完整隨訪資料的胃癌患者1225例(均有病理學(xué)診斷)。

5、對這些胃癌患者進(jìn)行詳細(xì)的家系調(diào)查和家系隨訪，詳細(xì)記錄家族史，患腫瘤人數(shù)，腫瘤部位和腫瘤類型，患病年齡。收集8個(gè)符合國際遺傳性胃癌協(xié)作組制定的(ICG-HGC)遺傳性胃癌家系和可疑ICG-HGC家系，繪制其家系圖譜，分析其發(fā)病病理特點(diǎn)及預(yù)后，同時(shí)了解其家族成員發(fā)生相關(guān)腫瘤特點(diǎn)。
　　 結(jié)果：中國南方胃癌家族史的站3.1％，符合ICG-HGC篩選標(biāo)準(zhǔn)的占0.98％。ICG-HGC家系和可疑ICG-HGC家系中，發(fā)病年齡29-65歲，

6、共有腫瘤病灶58個(gè)包括一例多源癌，其中胃腫瘤病灶41個(gè)，以胃竇、體部為主，病理類型為中低分化腺癌；胃外腫瘤17個(gè)，其中結(jié)直腸腫瘤6個(gè)；十一例先證者中根治術(shù)后四例生存時(shí)間大于3年，最長超過十年。
　　 結(jié)論：
　　 1.我國南方家族性胃癌表現(xiàn)為發(fā)病年齡輕，病理分化差，進(jìn)展期胃癌，遠(yuǎn)端胃發(fā)生為主。
　　 2.常伴發(fā)腸道腫瘤；遴選ICG-HGC家系應(yīng)注意與遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌(HNPCC)家系區(qū)
　　 3.

7、中國南方胃癌家族史的站3.1％，符合國際家族性胃癌篩選標(biāo)準(zhǔn)的占0.98％。
　　 第二部分上皮型鈣黏素基因表達(dá)及啟動(dòng)子甲基化與胃癌家族遺傳性
　　 目的：檢測家族遺傳性胃癌和伴胃癌家族史和腫瘤家族史胃癌及散發(fā)性胃癌的上皮性鈣黏附素基因(E-cadherin)啟動(dòng)子區(qū)甲基化和蛋白表達(dá)情況，探討家族性遺傳性胃癌與E-cadherin基因甲基化和蛋白表達(dá)的關(guān)系。
　　 方法：采用免疫組織化學(xué)方法檢測符合ICG-HGC診

8、斷標(biāo)準(zhǔn)的8例家族性遺傳性胃癌和伴胃癌家族史胃癌的有30例，伴腫瘤家族史胃癌患者30例，散發(fā)性胃癌20例的上皮性鈣黏附素蛋白表達(dá)情況及上述標(biāo)本的E-cadherin基因啟動(dòng)子甲基化情況，進(jìn)行分析，探討家族性胃癌發(fā)生的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)。
　　 結(jié)果：E-cadherin在各組胃癌中表達(dá)均下調(diào)，與正常組織差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。家族性遺傳性胃癌中E-cadherin表達(dá)下調(diào)與其他胃癌組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在各組中均不同程度發(fā)生E-cad

9、herin基因啟動(dòng)子甲基化，在家族遺傳性胃癌、伴胃癌家族史胃癌與腫瘤家族史和散發(fā)性胃癌相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1.上皮性鈣黏附素蛋白表達(dá)抑制在胃癌中并不少見，E-cadherin基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化可能是導(dǎo)致E-cadherin基因表達(dá)下調(diào)的重要原因。
　　 2.E-cadherin蛋白表達(dá)在家族遺傳性胃癌組明顯降低，E-cadherin基因可能是家族遺傳性胃癌的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)。
　　

10、 第三部分 E型鈣依賴粘附蛋白基因與家族遺傳性胃癌的關(guān)系
　　 目的：檢測家族遺傳性胃癌家系患者的E型鈣依賴粘附蛋白基因(E-cadherin)和蛋白表達(dá)和啟動(dòng)子區(qū)甲基化及胚系和體細(xì)胞突變情況，探討E-cadherin基因在中國家族遺傳性胃癌中的作用。
　　 方法：8個(gè)符合家族遺傳性胃癌(ICG-HGC)的患者的腫瘤和血液或正常組織標(biāo)本，采用免疫組化、甲基化特異PCR、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、變性高效液相色譜分析(DHP

11、LC)和直接測序法對E-cadherin基因進(jìn)行蛋白、啟動(dòng)子甲基化和體細(xì)胞和胚系突變的全基因篩查。
　　 結(jié)果：免疫組化檢測7個(gè)患者E-cadherin基因蛋白表達(dá)陰性，1個(gè)表達(dá)明顯下調(diào)；6個(gè)患者腫瘤組織標(biāo)本表現(xiàn)為啟動(dòng)子甲基化，5個(gè)患者在腫瘤組織標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)了6個(gè)突變，包括兩個(gè)同義突變和4個(gè)錯(cuò)義突變，而在正常組織未發(fā)現(xiàn)同樣的種系突變：4個(gè)患者表現(xiàn)為既有體細(xì)胞突變又有啟動(dòng)子甲基化現(xiàn)象，2個(gè)患者僅表現(xiàn)為啟動(dòng)子甲基化，1個(gè)患者僅發(fā)現(xiàn)體細(xì)

12、胞突變，1個(gè)患者既沒有體細(xì)胞突變也沒有啟動(dòng)子甲基化現(xiàn)象。
　　 結(jié)論：
　　 1.E-cadherin種系突變在我國家族遺傳性胃癌中可能并不常見，。
　　 2.E-cadherin基因的體細(xì)胞突變和啟動(dòng)子甲基化可能是導(dǎo)致家族性胃癌患者E-cadherin基因的下調(diào)的主要原因：可能還有其他的分子途徑參于E-cadherin基因的下調(diào)機(jī)制。
　　 第四部分胃癌家族遺傳性的研究
　　 目的：檢測30例伴

13、家族史胃癌和8例遺傳性胃癌家系患者的E-鈣粘附素基因(E-cadherin)的蛋白表達(dá)和啟動(dòng)子甲基化及胚系突變情況，探討E-cadherin基因在我國家族性遺傳性胃癌中的意義。
　　 方法：采用免疫組織化學(xué)、甲基化特異性PCR(MS-PCR)、變性高效液相色譜技術(shù)(DHPLC)和直接測序法對30例伴家族史胃癌和8例符合家族遺傳性胃癌篩選標(biāo)準(zhǔn)(ICG-HGC)的患者的血液或正常組織標(biāo)本的E-cadherin基因進(jìn)行檢測。
　

14、　 結(jié)果：16例伴胃癌家族史胃癌腫瘤組織標(biāo)本E-cadherin陰性表達(dá)，遺傳性胃癌腫瘤標(biāo)本E-cadherin基因7個(gè)表達(dá)陰性，1個(gè)表達(dá)明顯下調(diào)；伴胃癌家族史胃癌19例和遺傳性胃癌6例標(biāo)本表現(xiàn)為啟動(dòng)子甲基化。在30例伴家族史胃癌中2例患者發(fā)現(xiàn)了3個(gè)同義突變，而在遺傳性胃癌的中未發(fā)現(xiàn)E-cadherin種系突變。
　　 結(jié)論：
　　 1.我國家族遺傳性胃癌中E-cadherin種系突變可能并不常見，或有其它遺傳易感基因