金針菇子實體水溶性多糖純化、結(jié)構(gòu)鑒定及對乙酰膽堿酯酶抑制活性的研究.pdf

1、金針菇(Flammulina Velutipes，F(xiàn)V)是一種大型食用真菌，別名有樸菇、樸覃、冬菇、毛柄金錢菌、枸菌等。金針菇多糖(FlammulinaVelutipes Polysaccharides，F(xiàn)VP)是從真菌金針菇中提取的一種多糖復合物，具有抗氧化、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、益智等多種功效。本文對金針菇多糖的研究主要分為三個部分:分別是乙酰膽堿酯酶篩選系統(tǒng)的建立、金針菇多糖的純化及活性研究和金針菇多糖純化組分的結(jié)構(gòu)的鑒定。
　

2、　實驗首先建立乙酰膽堿酯酶抑制劑的篩選優(yōu)化條件:pH=8.0的100mmol/L PBS緩沖溶液，AChE終濃度為0.05u/mL，ATCI終濃度為0.10mmol/L，顯色劑DTNB終濃度為0.0667mmol/L，陽性對照為70μg/L的石杉堿甲，體系反應(yīng)溫度為37℃，反應(yīng)時間為30min，測定波長為412nm。并對金針菇多糖進行了提取，得到三個組分，分別為:FVP40，F(xiàn)VP60，F(xiàn)VP80，進一步對其活性進行了分析，得出FVP6

3、0組分活性最高，達到46.17％。選出活性較高的FVP60組分和FVP40組分的粗多糖，對其后續(xù)的純化及結(jié)構(gòu)鑒定進一步分析。
　　FVP40和FVP60經(jīng)DEAE Sapharose fast flow陰離子交換柱和Sephacryl S系列凝膠柱層析分離純化后，分別得到兩個組分:FVP40C-1和FVP60C-1。經(jīng)HPLC檢測均為均一多糖組分。紫外全掃描結(jié)果顯示兩者均不含核酸和蛋白質(zhì)。
　　FVP40和FVP60通過單糖

4、組成分析和甲基化分析，綜合分析結(jié)果可得出:FVP40C-1，主要由五種單糖構(gòu)成:巖藻糖、木糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖，摩爾比為:0.62∶1.00∶2.55∶0.93∶2.90;推斷主鏈為葡萄糖1，6位連接和半乳糖1，6位連接方式，甘露糖和木糖的糖殘基位置較多，連接方式相對比較復雜，還不能確定具體連接方式;巖藻糖一部分在支鏈上，另一部分以端基形式存在。FVP60C-1，主要由三種單糖構(gòu)成:葡萄糖、甘露糖、半乳糖，摩爾比為1.54∶1.0