內(nèi)皮細胞原代培養(yǎng)和伊曲替酸調控的研究.pdf

1、銀屑病是一種常見并易復發(fā)的慢性炎癥性皮膚病。由于本病發(fā)病率較高，易于復發(fā)，病程較長，尤以侵犯青壯年為多，故對患者的身體健康和精神影響甚大。因此，銀屑病是當前皮膚科領域內(nèi)重點研究的疾病之一。隨著近年來腫瘤血管新生(angiogenesis)在癌癥研究和臨床腫瘤治療學方面取得的積極成果，使人們對非腫瘤性血管新生性疾病也表現(xiàn)出了極大的興趣。根據(jù)銀屑病皮損的組織病理特征之一是真皮乳頭層微血管擴張和內(nèi)皮細胞增生，針對真皮內(nèi)血管新生與銀屑病關系的研

2、究成為其發(fā)病機理研究的新方向之一，并且有許多學者試圖通過抑制血管新生而達到治療銀屑病的目的。本研究通過原代培養(yǎng)血管內(nèi)皮細胞，從體外實驗的角度探討維A酸類藥物伊曲替酸對內(nèi)皮細胞增殖的調控作用，以及對內(nèi)皮細胞周期的影響，從而進一步探討通過藥物抑制血管新生，來達到治療銀屑病的目的。 本實驗分為三個部分，第一部分為原代培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)皮細胞，并從直接顯微鏡下觀察形態(tài)和第Ⅷ因子相關抗原(ⅧRA)的免疫組化染色鑒定細胞；第二部分采用MTr比色法

3、檢測伊曲替酸在不同作用時間和不同濃度，對內(nèi)皮細胞、角質形成細胞以及ECV-304細胞株的增殖調控；第三部分采用流式細胞技術檢測伊曲替酸在不同作用時間和不同濃度，對內(nèi)皮細胞和角質形成細胞的細胞周期的影響。 研究結果顯示：(1)原代培養(yǎng)的臍靜脈內(nèi)皮細胞在顯微鏡下表現(xiàn)為單層生長的多角形細胞，有典型的“鋪路石”形態(tài)，ⅧRA免疫組化染色見到細胞漿內(nèi)陽性的棕褐色顆粒；(2)伊曲替酸對內(nèi)皮細胞增殖的作用表現(xiàn)為，隨著藥物濃度的逐漸升高，先促進細

4、胞增殖，到一定濃度則呈抑制作用，是雙向調控趨勢。而對角質形成細胞和ECV-304則表現(xiàn)為直接抑制的作用。并且伊曲替酸對內(nèi)皮細胞和角質形成細胞的作用隨著作用時間的延長而更加顯著；(3)伊曲替酸對內(nèi)皮細胞和角質形成細胞的細胞周期有完全不同的影響，使內(nèi)皮細胞的周期阻滯于G1期，而角質形成細胞則被阻滯于S期；(4)伊曲替酸對ECV-304作用與作用在角質形成細胞相一致，表現(xiàn)為直接抑制增殖，而與血管內(nèi)皮細胞的作用不相一致。 本實驗結論：人