乳腺癌中線粒體DNA拷貝量變化及相關(guān)mRNA表達(dá)的意義.pdf

1、背景：線粒體DNA(mitochodrial DNA，mtDNA)作為核外唯一的遺傳物質(zhì)，因缺乏組蛋白保護(hù)，且損傷修復(fù)系統(tǒng)不完善，容易成為致癌物質(zhì)攻擊的靶子，現(xiàn)已研究發(fā)現(xiàn)其與多種疾病和多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。mtDNA cyt-b基因編碼的是氧化磷酸化呼吸鏈中的復(fù)合體Ⅲ(泛醌．細(xì)胞色素C還原酶)中的一個亞基，基因進(jìn)化速度適中，比較穩(wěn)定。近年來許多與疾病有關(guān)的mtDNA的相關(guān)基因的表達(dá)，以及線粒體DNA特異性突變在線粒體基因穩(wěn)定區(qū)域的不

2、斷被發(fā)現(xiàn)，為疾病的診斷和研究提供了可靠的依據(jù)。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，現(xiàn)在也已經(jīng)成為腫瘤研究領(lǐng)域研究的熱點。 目的：1)檢測線粒體DNA的拷貝量在乳腺癌中的變化；2)檢測mtDNA Cyt-b基因和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的mRNA在乳腺癌中表達(dá)；3)檢測VEGF蛋白和MVD；4)探討它們在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用和關(guān)系。 方法：1)采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，分別擴(kuò)增乳

3、腺癌組織20例，癌旁正常組織20例的線粒體．D-loop區(qū)的HV<,1>和HV<,2>區(qū)，并以核基因組的β-actin作為定量標(biāo)準(zhǔn)物；利用聚丙烯酰胺凝膠電泳法比較兩者mtDNA拷貝量的差異； 2)采用逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)(Reversed-transcription PCR，RT-PCR)，分別對乳腺癌標(biāo)本19例，癌旁組織19例的mtDNA Cyt-b和VEGF的mRNA表達(dá)進(jìn)行檢測，并以核基因組的β-actin作為定量標(biāo)準(zhǔn)物，比較兩種

4、基因在乳腺癌組織和癌旁組織中的表達(dá)的差異； 3)采用S-P免疫組織化學(xué)法，對42例乳腺癌組織，30例癌旁組織的VEGF蛋白和CD<,34>蛋白進(jìn)行檢測，比較它們在乳腺癌和癌旁組織中的差異。 結(jié)果： 1)mtDNAHV<,1>和HV<,2>的拷貝量(以β-actin作內(nèi)參)，在乳腺癌組織中HV<,1> 0.864±0.219、HV<,2>0.884±0.237，低于癌旁組織HV<,1>1.353±0.817、HV<,2> 2.4

5、71±0.168，在兩者中比較有差異(P<0.05和P<0.01)，并且HV<,2>更為顯著； 2)mtDNA Cyt-b和VEGF的mRNA表達(dá)，在乳腺癌組織中Cyt-b 0.843±0.147、VEGF 1.264±0.395，均高于癌旁組織Cyt-b 0.284±0.118、VEGF 0.725±0.212，在兩者中比較都有顯著性差異 （P<0.01)，并且mtDNA Cyt-b和VEGF的mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.

6、01)； 3)VEGF蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)率為73.8％(31/42)，在癌旁組織中的表達(dá)率10％(3/30)，兩者比較有顯著性差異(P<0.01)，其中VEGF蛋白的表達(dá)與VEGF的mRNA表達(dá)呈正相關(guān)性(P<0.01)；微血管密度MVD在VEGF高表達(dá)組65.300±20.023，在VEGF低表達(dá)組36.440±18.450，兩者比較有顯著性差異(P<0.01)，并且MVD與VEGF的mRNA和蛋白的表達(dá)均呈正相關(guān)性(均為P<0

7、.01)。 結(jié)論：1)乳腺癌組織中mtDNA拷貝量低于癌旁組織，可用于乳腺癌的早期診斷； 2)乳腺癌組織中mtDNA Cyt-b的的mRNA表達(dá)高于癌旁組織，可成為一種新的乳腺癌標(biāo)志物； 3)乳腺癌組織中VEGF的mRNA及其蛋白的表達(dá)高于癌旁組織； 4)乳腺癌中mtDNA Cyt-b的表達(dá)與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，推測兩者之間有一定的信號表達(dá)；5)乳腺癌中VEGF蛋白的表達(dá)與VEGFmRNA的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系；6)微血管密