胃腺癌組織中mina53、caveolin-1的表達(dá)及其臨床意義研究.pdf

1、背景: c-myc是原癌基因myc家族的成員，在細(xì)胞增殖、分化和凋亡中發(fā)揮著重要而廣泛的作用。由于c-myc作用廣泛，針對(duì)其的診斷和治療缺乏特異性。Mina53與caveolin-1作為c-myc相關(guān)基因，在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮不同的作用。Mina53是新近發(fā)現(xiàn)的c-myc下游靶基因之一，編碼分子量為53kD的核蛋白。新近研究發(fā)現(xiàn)mina53廣泛參與細(xì)胞增殖調(diào)控，在多種腫瘤組織如結(jié)腸癌、食管癌、肝癌中高表達(dá)；在胃癌中研究甚少。我們的前期

2、研究通過免疫組化技術(shù)發(fā)現(xiàn)，Mina53在胃腺癌發(fā)生過程中逐漸增高。其在胃癌組織中高表達(dá)，并與腫瘤直徑、浸潤(rùn)深度、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、以及TNM分期相關(guān)。作為RT-PCR結(jié)合Real-time PCR證實(shí)c-myc與mina53mRNA在胃癌中高表達(dá)，而且這兩個(gè)基因的表達(dá)呈正相關(guān)。為了更加充分研究 Mina53和c-Myc的相關(guān)關(guān)系，我們擬采用激光顯微切割技術(shù)（laser capture microdissection，LCM）

3、結(jié)合蛋白免疫印記技術(shù)（western blot，WB），進(jìn)一步定量研究胃腺癌組織中Mina53、Caveolin-1的蛋白表達(dá)及其兩者之間的關(guān)系，為胃癌預(yù)后判斷和靶向治療提供更充分的依據(jù)。Lauren分型是胃癌病理學(xué)中一種重要的分型方法。其中腸型和彌漫型胃癌通常被認(rèn)為有不同的起源。將這兩種類型胃癌不加區(qū)分地研究有可能會(huì)遺漏和掩蓋一些信息。在本文中也將分別對(duì)mina53在這兩型胃癌中的表達(dá)與臨床病理資料的關(guān)系進(jìn)行分析。
　　 Ca

4、veolin-1基因位于腫瘤中突變多發(fā)的7q31.1的1的FRA7G位點(diǎn)，其編碼的蛋白Caveolin-1是細(xì)胞膜表面小凹（caveolae）的主要結(jié)構(gòu)蛋白。部分研究表明，caveolin-1是c-myc的下游基因，在轉(zhuǎn)錄水平受到c-myc的調(diào)控，并在膀胱癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤中高表達(dá)。另外一些研究則發(fā)現(xiàn)其在乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌中表達(dá)下降，并認(rèn)為其為一種候選抑癌基因。有學(xué)者觀察到Caveolin-1在胃癌中表達(dá)明顯下降。在腫瘤的

5、發(fā)生發(fā)展中所起的作用仍不十分明確。有報(bào)道顯示，Caveolin-1在原發(fā)部位來源胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)下降，在轉(zhuǎn)移癌來源胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)上升，并推測(cè)原癌基因c-met與這一表現(xiàn)相關(guān)?？傊瑢?duì)Caveolin-1在胃癌的發(fā)生發(fā)展中所起的作用仍存在許多爭(zhēng)議，相關(guān)研究仍比較少。本研究欲進(jìn)一步探究Caveolin-1在胃癌中的表達(dá)以及與c-Myc和c-Met關(guān)系，期望能更深入了解Caveolin-1在胃癌中的意義，更加全面地了解胃癌發(fā)生發(fā)展的分子

6、機(jī)制，為胃癌的診斷和治療提供特異的分子標(biāo)志。
　　 第一部分胃癌組織中Mina53的表達(dá)及其意義
　　 目的：檢測(cè)胃癌及其癌旁相對(duì)正常組織中Mina53和c-Myc蛋白水平的表達(dá)情況，分析其表達(dá)差異以及Mina53和c-Myc的相關(guān)性及其意義。
　　 方法：選擇12例胃癌標(biāo)本，應(yīng)用激光捕獲顯微切割技術(shù)（LCM）聯(lián)合免疫蛋白印跡（western blot）技術(shù)，檢測(cè)癌組織和癌旁相對(duì)正常組織（遠(yuǎn)離癌灶10cm以上）中

7、Mina53和c-Myc表達(dá)水平。從前期應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)的胃癌組織中分別隨機(jī)選擇32例腸型胃癌和彌漫型胃癌，研究其中Mina53的表達(dá)情況，分析各這兩型胃癌中Mina53的表達(dá)水平與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。
　　 結(jié)果：1.胃癌組織中Mina53和c-Myc蛋白表達(dá)水平均顯著高于癌旁正常組織（P<0.01 與P<0.05）。2.胃癌組織中Mina53的表達(dá)與c-Myc呈顯著正相關(guān)（r=0.805，P<0.01）。3.部分胃癌

8、組織中的c-Myc的表達(dá)反而下降。4. Mina53在彌漫型胃癌中的過表達(dá)水平均顯著高于腸型胃癌（75％對(duì)50％，P＜0.001）；5.不同分型胃癌組織中Mina53表達(dá)水平與患者的性別、年齡及腫瘤發(fā)生部位皆無(wú)關(guān)。Mina53在腸型胃癌中的表達(dá)與病灶大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、是和TNM分期呈正相關(guān)（P <0.05）。而在彌漫型胃癌中Mina53的過表達(dá)僅僅與淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)。
　　 結(jié)論：胃癌組織中mina53在蛋白水平

9、全部表達(dá)增高，可做為胃癌的一個(gè)特異的腫瘤標(biāo)記物。胃癌中Mina53主要受c-Myc調(diào)控。C-Myc過表達(dá)而引起其下游靶基因Mina53表達(dá)水平相應(yīng)增高這一事件可能與胃癌的發(fā)生進(jìn)展密切相關(guān)。因此，Mina53有望成為胃癌基因治療的特異性靶點(diǎn)。部分病例胃癌組織中c-Myc的表達(dá)相對(duì)于癌旁組織反而下降，提示mina53可能還受其他基因的調(diào)控。Mina53的表達(dá)在不同類型的胃癌中顯著不同，并與不同的臨床病理因素相關(guān)，說明腸型和彌漫型胃癌具有不同

10、的組織起源。并且提示Mina53可作為胃癌組織分型的一個(gè)腫瘤標(biāo)記物，并為胃癌的發(fā)生發(fā)展研究提供新的方向。
　　 第二部分胃癌組織中caveolin-1基因的表達(dá)及其意義
　　 目的：檢測(cè)Caveolin-1和c-Met、c-My基因在胃癌發(fā)生發(fā)展中的表達(dá)及其與臨床病理因素之間的關(guān)系，研究胃癌及其癌旁相對(duì)正常組織中Caveolin-1和c-Met、c-Myc蛋白水平的表達(dá)情況，分析其表達(dá)差異以及Caveolin-1 和c-

11、Met、c-Myc表達(dá)的相關(guān)性。
　　 方法：應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)32例正常胃粘膜、30例慢性非化生性萎縮性胃炎、35例慢性化生性萎縮性胃炎、40例異型增生及72例胃癌組織中Caveolin-1和c-Met 、c-Myc的表達(dá)情況，分析各組織類型Caveolin-1、c-Met 的差異表達(dá)；Caveolin-1和c-Met表達(dá)水平與胃癌臨床病理特征的關(guān)系；以及胃癌組織中c-Myc與Caveolin-1、c-Met與Caveoli

12、n-1的關(guān)系。隨機(jī)選擇7例胃癌標(biāo)本，應(yīng)用激光捕獲顯微切割技術(shù)（LCM）聯(lián)合蛋白免疫印跡（western blot）技術(shù)，檢測(cè)癌組織和癌旁相對(duì)正常組織（遠(yuǎn)離癌灶10cm 以上）中c-Myc和Caveolin-1表達(dá)水平。同時(shí)采用上述方法檢測(cè)，檢測(cè)上述4例胃癌組織和正常粘膜的間質(zhì)中c-Myc與Caveolin-1的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：1.C-Myc和c-Met在胃癌組織中的表達(dá)水平均顯著高于正常胃粘膜上皮（62.5％對(duì)0％，P＜

13、0.001；70.8％對(duì)21.8％，P＜0.001），而Caveolin-1的表達(dá)卻相對(duì)下降（13.1％對(duì)93.75％，p<0.001）；2.Caveolin-1在正常胃粘膜、慢性非化生性萎縮性胃炎、慢性化生性萎縮性胃炎、異型增生及胃癌組織中表達(dá)水平逐漸下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。3.胃癌組織中Caveolin-1表達(dá)水平與患者的性別、病灶大小、Lauren分型、年齡及腫瘤發(fā)生部位無(wú)關(guān)，而與分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

14、和TNM 分期呈正相關(guān)（P<0.05）。差分化型胃癌高于分化型（P<0.001）；浸潤(rùn)深度為（T3+T4）組較（T1+T2）組高（P<0.001）；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高（P<0.05）；TNM分期越晚Mina53表達(dá)水平越高（P<0.05）。4.胃癌組織中caveolin-1與c-Myc的表達(dá)成正相關(guān)（rs=0.321,P<0.01）。5. 蛋白免疫印跡顯示胃癌組織中c-Myc與Caveolin-1的表達(dá)正相關(guān)（r=0.7

15、52, p<0.05），胃癌間質(zhì)中c-Myc與Caveolin-1的表達(dá)負(fù)相關(guān)（r=0.975, p<0.05）。6.c-Met不同表達(dá)組見Caveolin-1的表達(dá)未見明顯差異。
　　 結(jié)論：1. Caveolin-1的表達(dá)在胃腺癌變進(jìn)程中逐漸下降，間質(zhì)中Caveolin-1的表達(dá)也逐漸下降，是胃癌發(fā)生過程中的早期分子事件。2.胃癌實(shí)質(zhì)和間質(zhì)中Caveolin-1的表達(dá)相對(duì)于胃正常上皮和癌旁相對(duì)正常組織均明顯下降，可做為胃癌的