聚苯乙烯型金屬螯合親合樹脂的合成及其應(yīng)用.pdf

1、固定化金屬螯合親合色譜法(IMAC)是近20年發(fā)展起來的一項(xiàng)新型分離技術(shù)，常規(guī)的金屬螯合親合介質(zhì)多以葡聚糖或瓊脂糖等軟基質(zhì)作為載體，但這些介質(zhì)機(jī)械強(qiáng)度小穩(wěn)定性差，難以用于加壓體系而限制了其在大規(guī)模蛋白質(zhì)分離純化中的應(yīng)用規(guī)模和效率。而聚苯乙烯系樹脂由于具有原料來源廣泛、價(jià)廉且易功能化等優(yōu)點(diǎn)，引起了人們的注意，但是聚苯乙烯系載體具有強(qiáng)疏水性，因此一般在載體上引入親水性間隔臂，以增強(qiáng)相應(yīng)金屬螯合樹脂的親水性。常用的間隔臂有環(huán)氧基、二胺基等。<

2、br>　　 為此本文以氯乙酰聚苯乙烯(PS－Acyl-C1)為載體分別引入乙二胺(EDA)和己二胺(HMD)得到兩種胺基樹脂(PS－Acyl-EDA和PS-Acyl-HMD)，該方法可以克服氯甲基化樹脂制備過程中的弊端，且制備的胺基樹脂可以作為一個(gè)活性中間體，進(jìn)一步衍生化制備多種功能介質(zhì)。
　　 以PS－Acyl－EDA為載體，使用氯乙酰氯將其活化，之后固載亞胺二乙酸功能基團(tuán)，合成了聚苯乙烯型亞胺二乙酸樹脂。優(yōu)化了亞胺二乙酸用

3、量、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度及NaOH的濃度等條件對(duì)聚苯乙烯型亞胺二乙酸樹脂的影響，最佳反應(yīng)條件為：IDA用量為氯乙?；?.5倍(摩爾比)、NaOH濃度25％，60℃下反應(yīng)24小時(shí)。
　　 以PS-Acyl-EDA作為載體，與環(huán)氧氯丙烷(ECH)反應(yīng)制得環(huán)氧化聚苯乙烯樹脂，再固載L-苯丙氨酸(L-Phe)制得聚苯乙烯型苯丙氨酸樹脂。考察了溶劑體系、NaOH用量、L-Phe用量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間等條件對(duì)苯丙氨酸聚苯乙烯樹脂的影響，結(jié)

4、果表明：以水作為溶劑、Phe：NaOH：環(huán)氧基=10:10:1、100℃下反應(yīng)12-18小時(shí)，可得到擔(dān)載量為0.842 mmol·g-1的聚苯乙烯型苯丙氨酸樹脂。
　　 將聚苯乙烯型苯丙氨酸樹脂和聚苯乙烯型亞胺二乙酸樹脂螯合金屬鎳離子(Ni2+)，分別得到聚苯乙烯型苯丙氨酸鎳樹脂和聚苯乙烯型亞胺二乙酸鎳樹脂，以醛糖還原酶融合蛋白為對(duì)象，初步考察了聚苯乙烯型苯丙氨酸鎳樹脂(PS-Phe-Ni2+)和聚苯乙烯型亞胺二乙酸鎳樹脂(PS

5、-IDA-Ni2+)在純化融合蛋白中的應(yīng)用。將不經(jīng)過硫酸銨沉淀、透析等預(yù)處理的粗酶液，直接用于親合純化，簡化了純化工藝，且聚苯乙烯型苯丙氨酸鎳樹脂經(jīng)過二次吸附洗脫之后，由SDS-PAGE結(jié)果表明，可得到單一條帶；聚苯乙烯型亞胺二乙酸鎳樹脂在粗酶液中加入5 mM咪唑進(jìn)行吸附洗脫，得到的蛋白比酶活為30.66 U/mg，純化倍數(shù)達(dá)到15倍。由此可以說明制備的兩種聚苯乙烯型鎳樹脂可較好的純化融合蛋白，且操作簡單、周期短，有望在融合蛋白純化方面