遠(yuǎn)緣鏈球菌耐氟菌株與親代菌株基因表達(dá)差異比較.pdf

1、氟化物的長(zhǎng)期、廣泛使用可能導(dǎo)致耐氟菌株的產(chǎn)生，為齲病的防治提出了新的挑戰(zhàn)。為探索耐氟菌株部分致齲毒力的改變，以及其與親代菌株相比在基因表達(dá)水平上是否存在差異，本實(shí)驗(yàn)選擇遠(yuǎn)緣鏈球菌6715為研究對(duì)象，采用細(xì)菌培養(yǎng)、耐氟誘導(dǎo)、生理生化鑒定、抑制性消減雜交等微生物學(xué)和分子生物學(xué)方法，探討耐氟菌株的適應(yīng)性耐酸能力及耐氟突變過程中，基因表達(dá)的改變。 一．遠(yuǎn)緣鏈球菌6715耐氟菌株的體外誘導(dǎo)及鑒定采用逐步誘導(dǎo)法在體外誘導(dǎo)了遠(yuǎn)緣鏈球菌6715

2、的耐氟菌株，該菌株可在高氟水平（1000微克/毫升）中生存，且在無氟培養(yǎng)基中連續(xù)傳代二十次，其耐氟特性不消失。經(jīng)形態(tài)學(xué)研究和生理生化鑒定，發(fā)現(xiàn)耐氟菌株與親代菌株具有相似的形態(tài)，且兩者均可發(fā)酵甘露醇、七葉苷、棉子糖及精氨酸，但在發(fā)酵甘露醇時(shí)，耐氟菌株出現(xiàn)遲緩發(fā)酵，反應(yīng)陽性出現(xiàn)時(shí)間較親代菌株晚24小時(shí)。 二．遠(yuǎn)緣鏈球菌6715耐氟菌株與親代菌株適應(yīng)性耐酸能力的比較研究適應(yīng)性耐酸被認(rèn)為是影響細(xì)菌生存及致齲性的重要因素。它是指對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)

3、的細(xì)菌在亞致死性的低pH值環(huán)境中生長(zhǎng)后,可抵抗致死性酸化的殺傷,產(chǎn)生適應(yīng)性耐酸的能力。通過比較研究發(fā)現(xiàn)：S.6715耐氟菌株較親代具有更強(qiáng)的適應(yīng)性耐酸能力。在預(yù)酸化pH值為5.0時(shí)，其最大生存率10.55％. 三．遠(yuǎn)緣鏈球菌6715耐氟菌株與親代菌株基因表達(dá)差異的比較研究為了解遠(yuǎn)緣鏈球菌6715耐氟菌株（FR-6715）與親代菌株（S.6715）基因表達(dá)的差異，本研究采用抑制性消減雜交技術(shù)得到遠(yuǎn)緣鏈球菌6715耐氟菌株菌細(xì)胞中

4、表達(dá)顯著增強(qiáng)的片段，經(jīng)對(duì)比確定為結(jié)構(gòu)基因fruA和SMU.438c，fruA編碼的果糖水解酶，可以利用胞外多糖中的果糖多聚體這一碳源儲(chǔ)庫(kù)，通過無氧酵解的方式，進(jìn)行產(chǎn)酸致齲，可能是主要致齲基因之一。SMU.438c基因?yàn)橐欢伍L(zhǎng)約200bp的核苷酸序列，其具體功能尚未明確，推斷與鏈球菌代謝機(jī)制相關(guān)。 綜合分析，本研究發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)緣鏈球菌6715耐氟菌株與親代菌株相比，具有更強(qiáng)的致齲毒力，且在耐氟突變過程中，fruA和SMU.438c基因表