魚精蛋白工程化研究.pdf

1、魚精蛋白是一類存在于各類雄性動物成熟精巢組織中的多聚陽離子肽。魚精蛋白用作新型的食品防腐劑和藥物，證實(shí)具有耐熱、抗菌、安全和多種保健作用等優(yōu)點(diǎn)。但同時(shí)在提高魚精蛋白的耐酸性、增加抑制革蘭氏陰性菌能力和減少溶血方面需要繼續(xù)研究。這些研究取得的進(jìn)展，有助于發(fā)展魚精蛋白在乳品添加劑中的應(yīng)用，有助于研發(fā)新型抗菌素。
　　 本文旨在通過改變天然魚精蛋白的氨基酸序列，提高魚精蛋白的耐酸性、賦予和提高魚精蛋白抑制革蘭氏陰性菌能力以及在酸性條件

2、下協(xié)助提高酪蛋白的穩(wěn)定性。為魚精蛋白大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用提供更好的目的基因。
　　 本論文人工設(shè)計(jì)合成了一種魚精蛋白——將天然鮭魚精蛋白序列PRRRRSSSRPVRRRRRPRVSRRRRRRGGRRRR改變成PRRRRSSSRPVRRRRRPRVSSSRRRRGGRRRR。由此降低了天然魚精蛋白的兩個(gè)正電荷，增加了疏水性，新產(chǎn)生了一個(gè)與連續(xù)精氨酸殘基相鄰的絲氨酸簇，形成了相似于酪蛋白中的兩個(gè)局部序列（精氨酸左/右側(cè)連續(xù)出現(xiàn)絲氨酸）。

3、
　　 通過對革蘭氏陽性菌，包括金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草桿菌（Bacillus subtilis）和四聯(lián)球菌（Micrococcus tetragenus）以及革蘭氏陰性菌，包括大腸桿菌（Escherichia coli）和圓褐固氮菌（Azotobacter chroococcum）五種菌的抑制效果試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，新設(shè)計(jì)合成的魚精蛋白對革蘭氏陰性菌大腸桿菌和圓褐固氮菌的最低抑菌濃度分別是250

4、μg/ml和500μg/ml，較天然魚精蛋白硫酸鹽對革蘭氏陰性菌的抑制效果稍有提高。同時(shí)新設(shè)計(jì)合成的魚精蛋白對革蘭氏陽性菌表現(xiàn)出了更好的抑制效果，尤其是對四聯(lián)球菌的抑制效果較之天然魚精蛋白硫酸鹽稍有提高，125μg/ml的添加量對其仍有良好的抑制效果。
　　 本文首次研究了添加魚精蛋白對牛奶體系穩(wěn)定性的影響，并且取得了較好的效果。將1000μg/ml、800μg/ml、500μg/ml、250μg/ml、125μg/ml五種不同

5、濃度梯度的新設(shè)計(jì)合成的魚精蛋白和天然鮭魚精蛋白硫酸鹽溶液各0.3 ml分別添加到35 ml新鮮牛奶中，用8％檸檬酸在低于20℃條件下調(diào)酸，結(jié)果顯示新設(shè)計(jì)合成的魚精蛋白較天然魚精蛋白硫酸鹽對牛奶耐酸穩(wěn)定性有少許提高，如果能夠降低魚精蛋白的使用成本，適當(dāng)?shù)亩嗵砑右恍懈玫男Ч?。魚精蛋白對牛奶穩(wěn)定性影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，與我們前面的理論分析和設(shè)想正好吻合，正是我們前面對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能分析的直接的事實(shí)說明。
　　 將1000μg/ml、

6、800μg/ml、500μg/ml、250μg/ml、125μg/ml五種不同濃度梯度的新設(shè)計(jì)合成的魚精蛋白和天然鮭魚精蛋白硫酸鹽溶液各0.3 ml添加到35 ml新鮮牛奶中，把牛奶在室溫下放置（環(huán)境溫度在12℃-20℃之間，時(shí)間為三月底到四月初），靜置觀察新鮮牛奶的存放天數(shù)，出現(xiàn)分層的先后順序。結(jié)果顯示：未加魚精蛋白的空白對照管6 h即可見分層，加入天然鮭魚精蛋白硫酸鹽溶液的樣品管可以放置12-15 h，加入新設(shè)計(jì)合成的魚精蛋白的樣品