nNOS及LXRα基因多態(tài)性與缺血性卒中的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、研究背景：
　　腦卒中具有發(fā)病率高、死亡率高、致殘率高及復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)，是全世界致死及致殘的主要病因，在中國(guó)已成為致死及致殘的首位原因，中國(guó)每年有150萬-200萬新發(fā)腦卒中病例，其中70-80％為缺血性卒中(Ischemic stroke，IS)。因此研究缺血性腦血管病的危險(xiǎn)因素及作用機(jī)制對(duì)防治此類疾病有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。多數(shù)研究提示IS的發(fā)病不僅與常見的傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素，如高血壓、糖尿病、高脂血癥、吸煙、心臟病、高同型半胱氨酸

2、血癥有關(guān)，而且具有一定的遺傳易感性，研究認(rèn)為遺傳因素在缺血性卒中的發(fā)生中所占比重平均為37.9％。
　　動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展是心、腦血管疾病的主要病因。而最近的研究表明nNOS基因和LXRα基因，通過不同機(jī)制作用于動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展。因此本研究選取了nNOS基因和LXRα基因這兩個(gè)與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)基因，采用候選基因病例對(duì)照的研究方法，分析了nNOS基因(rs2293050、rs2139733、rs7308402、rs1

3、483757)和LXRA基因(rs2167079、rs2279238)位點(diǎn)的基因型和等位基因在IS組、IS亞組及對(duì)照組中頻率分布差異，從而探討nNOS基因和LXRA基因多態(tài)性和中國(guó)北方漢族人群缺血性卒中的相關(guān)性，為更詳盡的了解發(fā)病潛在的遺傳機(jī)制提供分子流行病學(xué)依據(jù)，為早期診斷IS提供更多的分子生物學(xué)指標(biāo)。
　　研究方法：
　　采用病例-對(duì)照研究方法，病例組選取中國(guó)北方漢族缺血性腦卒中患者，共413例，其中男性201例，女性2

4、12例，年齡32-90歲間，均為漢族，彼此無親緣關(guān)系;選取性別、年齡與IS組相匹配的健康個(gè)體477例作為對(duì)照，男性224例，女性253例;在此基礎(chǔ)上將IS組和對(duì)照組按性別不同分為男女亞組。應(yīng)用單堿基延伸法(Multiplex SNaPshot)檢測(cè)nNOS基因(rs2293050、rs2139733、rs7308402、rs1483757)和LXRA基因(rs2167079、rs2279238)位點(diǎn)的多態(tài)性。用擬合優(yōu)度x2檢驗(yàn)驗(yàn)證每個(gè)位

5、點(diǎn)SNP基因型分布頻率是否符合Hardy-Weinberg平衡。采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件x2檢驗(yàn)各個(gè)位點(diǎn)基因型、等位基因在對(duì)照組與病例組及各亞組中的頻率分布差異、風(fēng)險(xiǎn)度分析，最后結(jié)合臨床資料，對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行Logistic回歸分析，排除性別、年齡、高血壓、糖尿病、吸煙、飲酒史等傳統(tǒng)混雜因素的干擾，以P＜0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。利用SHEsis在線軟件對(duì)nNOS基因的4個(gè)SNPs位點(diǎn)和LXRA基因的2個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行連鎖不平衡分析和單倍型分析。

6、
　　研究結(jié)果：
　　1、所有研究對(duì)象的每個(gè)SNPs基因型在抽樣群體中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05)，說明本研究所選取的樣本具有人群代表性適合做遺傳學(xué)分析。
　　2、nNOS基因rs7308402位點(diǎn)多態(tài)性在病例組與對(duì)照組的頻率分布:該位點(diǎn)的A等位基因及AG基因型頻率在病例組明顯低于對(duì)照組(P=0.041，P=0.037)。攜帶AG基因型的個(gè)體發(fā)生IS的風(fēng)險(xiǎn)經(jīng)過Logistic回歸分析校正

7、各種混雜因素后仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，發(fā)病危險(xiǎn)度降低到0.59倍(OR=0.59，95％CI:0.35-0.99; P=0.049)。女性亞組分析中，A等位基因及AG基因型的頻率分布也是有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的(P=0.002，P=0.001)，攜帶AG基因型的個(gè)體發(fā)生缺血性卒中的風(fēng)險(xiǎn)經(jīng)過Logistic回歸分析校正各種混雜因素后仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，發(fā)病危險(xiǎn)度降低到0.345倍(OR=0.35,95％CI:0.16-0.74; P=0.006)。
　　

8、3、LXRA基因rs2279238位點(diǎn)多態(tài)性在病例組與對(duì)照組的頻率分布:該位點(diǎn)的T等位基因及TT基因型頻率在病例組明顯高于對(duì)照組(P=0.013，P=0.006)。攜帶TT基因型的個(gè)體發(fā)生缺血性卒中的風(fēng)險(xiǎn)經(jīng)過Logistic回歸分析校正各種混雜因素后仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，發(fā)病危險(xiǎn)度增加到1.65倍(OR=1.65，95％CI:1.02-2.68，P=0.042)。女性亞組分析中，T等位基因及TT基因型的頻率分布也是有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的(P=0.00

9、1，P=0.001)，攜帶TT基因型的個(gè)體發(fā)生缺血性卒中的風(fēng)險(xiǎn)經(jīng)過Logistic回歸分析校正各種混雜因素后仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，發(fā)病危險(xiǎn)度增加到2.35倍(OR=2.35,95％CI:1.18-4.68; P=0.015)。
　　4、nNOS基因rs1483757、rs2139733、rs2293050位點(diǎn)基因型及等位基因頻率在病例組與對(duì)照組中的頻率分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與中國(guó)北方漢族人群的缺血性卒中發(fā)病無相關(guān)性。
　　5、LXRA

10、基因rs2167079位點(diǎn)基因型及等位基因頻率在病例組與對(duì)照組中的頻率分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與中國(guó)北方漢族人群的缺血性卒中發(fā)病無相關(guān)性。
　　6、nNOS基因單倍型在病例組與對(duì)照組中的分布頻率:GATA(rs1483757、rs2139733、rs2293050、Rs7308402)單倍型在病例組中的分布頻率明顯低于對(duì)照組，提示其可能是一種保護(hù)性的單倍型，(OR=0.59，95％CI:0.36-0.98，P=0.038)。
　　

11、7、nNOS基因rs2139733-rs2293050兩位點(diǎn)之間存在連鎖不平衡。
　　8、LXRA基因rs2167079-rs2279238兩位點(diǎn)之間不存在連鎖不平衡。
　　結(jié)論：
　　1、nNOS基因rs7308402位點(diǎn)的A等位基因及AG基因型能夠降低中國(guó)北方漢族人群尤其是女性人群患缺血性卒中的風(fēng)險(xiǎn)。
　　2、nNOS基因GATA(rs1483757-rs2139733-rs2293050-rs7308402