TAK1siRNA對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者滑膜細(xì)胞MMP1和TNF-a表達(dá)的影響.pdf

1、材料與方法:
　　一、實驗材料
　　1、12例標(biāo)本來源:中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨外科住院手術(shù)患者（住院時間2012年11月-2013年2月）。以上手術(shù)患者診斷都符合美國風(fēng)濕病學(xué)會1987年提出的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)，術(shù)前均已經(jīng)過倫理學(xué)認(rèn)證通過。
　　2、免疫組化染色試劑盒
　　3、DharmaFECT siRNA轉(zhuǎn)染試劑盒
　　4.ELISA試劑盒
　　二、實驗方法
　　1、細(xì)胞培養(yǎng)
　　RA患

2、者滑膜細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，用于實驗或傳代。
　　2、細(xì)胞鑒定
　　將培養(yǎng)至三代的滑膜細(xì)胞進(jìn)行免疫組化鑒定:
　　(1)取貼滿細(xì)胞的蓋玻片，用10％甲醛溶液固定30min，晾干，
　　(2)用PBS沖洗三次，再加入3％H2O25-10min，PBS沖洗，再加入正常善養(yǎng)血清，于室溫靜置10-15min，傾去，勿洗，甩干后，加一抗過夜，
　　(3)滴加辣根過氧化物酶，于室溫孵育10min，PBS沖沈3x3min，用DA

3、B顯色，當(dāng)顯色完全后復(fù)染，脫水，封片。
　　3、細(xì)胞轉(zhuǎn)染
　　嚴(yán)格按照試劑說明書規(guī)定，將滑膜細(xì)胞隨機(jī)分組后，進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
　　4、ELISA檢測
　　5、統(tǒng)計學(xué)分析
　　實驗結(jié)果:
　　本研究發(fā)現(xiàn):運(yùn)用轉(zhuǎn)染技術(shù)抑制轉(zhuǎn)化生長因子β激活激酶（TAK1）在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞中的表達(dá)后，可發(fā)現(xiàn)MMP1和TNF-a的表達(dá)有不同程度的降低。
　　結(jié)論:
　　在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜細(xì)胞中轉(zhuǎn)染TAK1