胰高血糖素樣肽-1類似物對(duì)非酒精性脂肪性肝病炎癥及纖維化通路的影響.pdf

1、背景及目的：
　　胰高糖素樣肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)抑制肝臟脂質(zhì)合成，促進(jìn)游離脂肪酸氧化，抑制肝臟糖異生，從而對(duì)非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)有一定治療作用，但尚不明確GLP-1是否還通過抑制肝臟炎癥和纖維化來緩解NAFLD。本研究主要探討GLP-1類似物Exenatide對(duì)高脂喂養(yǎng)的SD大鼠肝臟以及高脂誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞

2、炎癥、纖維化信號(hào)通路的影響及其可能機(jī)制。
　　方法：
　　1、23只雄性SD大鼠隨機(jī)分3組:對(duì)照組（8只），給予普通飼料喂養(yǎng)16周;高脂組(7只)，給予高脂飼料16周;Exenatide組（8只），給予高脂飼料16周，第9周起給予Exenatide10μg/kg ip.Bid持續(xù)8周。16周后處死大鼠，取肝臟組織，通過測(cè)定肝臟脂質(zhì)含量及油紅染色明確肝臟脂肪變性情況。體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞隨機(jī)分為3組:對(duì)照組，棕櫚

3、酸(palmitic acid, PA)干預(yù)組，棕櫚酸+Exenatide組，進(jìn)行油紅O染色判定肝細(xì)胞脂質(zhì)含量;
　　2、Western blot檢測(cè)各組肝臟Toll樣受體4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1/Smad(TGF-β1/Smad)途徑相關(guān)蛋白水平;將體外培養(yǎng)HepG2細(xì)胞隨機(jī)分為4組:對(duì)照組，棕櫚酸干預(yù)組，棕櫚酸+高劑量Exenatide(100nmol/L)組，棕櫚酸+低劑量Exenatid

4、e(10nmol/L)組，提取蛋白，進(jìn)一步通過Western blot檢測(cè)各組TLR4/NF-κB和TGF-β1/Smad途徑相關(guān)蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、肝臟及肝細(xì)胞脂肪變結(jié)果:與對(duì)照組大鼠比較，高脂組大鼠存在明顯的肝臟脂肪變性及肝臟甘油三酯(triglyceride，TG)含量上升(P＜0.01)，Exenatide組大鼠與高脂組比較，肝臟脂肪變性改善，肝臟TG含量下降(P＜0.01)。與對(duì)照組相比，PA干預(yù)后

5、，HepG2細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴形成增多(P＜0.01); Exenatide干預(yù)后，HepG2細(xì)胞脂滴較PA組明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　2、肝臟及HepG2細(xì)胞TLR4/NF-κB通路:大鼠:與對(duì)照組相比，高脂組大鼠肝臟TLR4、 MyD88、NF-κBp65蛋白水平顯著增加(P＜0.01);與高脂組相比，Exenatide干預(yù)后高脂大鼠肝臟TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白水平明顯下降(P＜0.01)

6、，Exenatide組TLR4和NF-κBp65蛋白水平甚至低于對(duì)照組。HepG2細(xì)胞:與Control組相比，PA組HepG2細(xì)胞TLR4、MyD88、NF-κ Bp65、p-IκBα蛋白水平顯著增加(P＜0.01);與PA組比較，不同濃度Exenatide干預(yù)后TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-IκBα蛋白水平均明顯下降(P＜0.01-0.05);與Exenatide(100nmol/L)組相比，Exenatide(10n

7、mol/L)組NF-κBp65、p-IκBα蛋白水平下降更明顯，甚至比Control組還低(P＜0.01)。
　　3、肝臟及HepG2細(xì)胞TGF-β1/Smad通路:大鼠:與對(duì)照組大鼠相比，高脂組大鼠肝臟TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白水平顯著增加(P＜0.01);與高脂組相比，Exenatide干預(yù)后TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白水平明顯下降(P＜0.01-0.05)。HepG2細(xì)胞:與對(duì)照組相比，PA組TGF

8、-β1、Smad2、Smad3蛋白水平顯著增加(P＜0.01-0.05);與PA組相比，不同濃度Exenatide干預(yù)后TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白水平均明顯下降(P＜0.01-0.05);Exenatide(10nmol/L)組TGF-β1、Smad3蛋白水平下降更明顯(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、Exenatide減輕高脂飲食誘導(dǎo)大鼠肝臟脂肪變，減輕棕櫚酸干預(yù)肝細(xì)胞脂肪變性，防止NAFLD形成。