重組纖粘連蛋白多肽CH50對腫瘤細(xì)胞侵襲能力的長效抑制作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究重組纖粘連蛋白(FN)多肽CH50對腫瘤細(xì)胞侵襲能力長效抑制作用及其機(jī)制。
　　方法：1.體外加CH50多肽培養(yǎng)黑色素瘤B-16F1細(xì)胞24h,通過黏附實(shí)驗(yàn),細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),觀察CH50多肽抑制B16-F1細(xì)胞的黏附,鋪展和侵襲能力。Real-time PCR檢測腫瘤組織MMP-2/MMP-9、cdc2、αv、β3等侵襲相關(guān)基因的表達(dá)。將CH50多肽培養(yǎng)的B-16F1細(xì)胞通過注射接種于C57BL/6小鼠后肢皮下,于14天后

2、檢測腫瘤細(xì)胞向小鼠腿部肌肉侵襲的能力及觀察腫瘤生長情況。
　　2.以H22細(xì)胞接種于BALB/c小鼠右腿部肌肉內(nèi),建立實(shí)驗(yàn)性小鼠肝癌模型。每隔3天腫瘤原位注射質(zhì)粒pCH510,進(jìn)行原位基因治療,采用RT-PCR和Western blot檢測體內(nèi)CH50表達(dá)水平。于注射后第30天處死小鼠,比較腫瘤大小,并喂養(yǎng)小鼠直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束,觀察小鼠生存時間并記錄。
　　結(jié)果：通過黏附實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)證明,CH50多

3、肽作用較長時間后,可以抑制B-16F1細(xì)胞的黏附能力,侵襲能力。CH50多肽能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞的cdc2、αv、β3、MMP-2、MMP-9等基因的表達(dá),從而抑制細(xì)胞對組織的侵襲能力。接種腫瘤細(xì)胞14天后的結(jié)果顯示,體外用CH50多肽處理過的B-16F1細(xì)胞在小鼠腿部形成的腫瘤對肌肉及其周圍組織侵襲的能力被顯著抑制。將CH50多肽長期治療接種肝癌細(xì)胞H22荷瘤小鼠,治療組的生存時間明顯長于對照組。
　　結(jié)論：CH50多肽通過下調(diào)