前列腺增生癥患者膀胱逼尿肌堿性成纖維細(xì)胞生長因子及表皮生長因子的變化及其意義.pdf

1、目的；良性前列腺增生(Benignprostatichyperplasia，BPH)是老年男性常見疾病之一，臨床上主要表現(xiàn)為膀胱刺激癥狀和梗阻癥狀。目前已有研究證實(shí)生長因子對BPH的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，但關(guān)于生長因子與BPH后膀胱逼尿肌的病理變化的相互關(guān)系目前了解不多。本研究即從基因和蛋白兩個水平上檢測BPH患者膀胱出口梗阻(bladderoutletobstruction，BOO)后膀胱逼尿肌中堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、表皮

2、生長因子(EGF)的表達(dá)來探討B(tài)PH引起B(yǎng)OO后膀胱逼尿肌病理變化與bFGF及EGF表達(dá)之間的關(guān)系。 材料與方法 臨床資料： 本研究對象為選取的山東大學(xué)齊魯醫(yī)院泌尿外科2001年¨月至2004年10月行開放手術(shù)的住院病人69例，分為同齡對照組、BPH逼尿肌穩(wěn)定組和BPH逼尿肌不穩(wěn)定組。如表1所示，三組病人年齡無顯著性差異(P＞0.05)。所有病人均為開放手術(shù)，手術(shù)時(shí)于膀胱切口靠近頂部處的切口兩側(cè)分別切取約1.5×

3、1cm大小的兩塊膀胱壁組織，剔除漿膜和粘膜后，將剩余逼尿肌組織一塊立即放入液氮中保存，另一塊放入福爾馬林液中保存。 實(shí)驗(yàn)方法： 一、采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測膀胱逼尿肌中bFGFmRNA及EGFmRNA的表達(dá)。 首先提取組織總RNA，行逆轉(zhuǎn)錄并進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。其反應(yīng)產(chǎn)物的凝膠電泳圖像輸入美國Kodak凝膠分析系統(tǒng)，應(yīng)用1DImageAnalysisSoftware進(jìn)行表達(dá)強(qiáng)度分析，計(jì)算相對系數(shù)

4、作為bFGFmRNA及EGFmRNA的相對表達(dá)水平，進(jìn)行半定量，作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 二、采用鏈霉素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(SABC)技術(shù)檢測膀胱逼尿肌細(xì)胞中bFGF和EGF蛋白的表達(dá)。 以PBS代替一抗作為免疫組化染色的陰性對照。結(jié)果判定：膀胱逼尿肌細(xì)胞胞漿內(nèi)含有棕黃色或棕褐色顆粒為陽性，每張切片在光鏡下連續(xù)計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)＜10％為陰性表達(dá)(-)，10-25％為弱陽性表達(dá)(+)，＞25-50％為中度陽性表達(dá)

5、(++)，＞50％為強(qiáng)陽性表達(dá)(+++～++++)。 統(tǒng)計(jì)方法：應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。 1.各組間病人年齡差異的檢驗(yàn)采用單因素方差分析，以P＜0.05為有顯著性差異，P＜0.01為有極顯著性差異。 2.bFGFmRNA、EGFmRNA的相對表達(dá)水平差異的檢驗(yàn)采用兩獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)過程，以P＜0.05為有顯著性差異，P＜0.01為有極顯著性差異。 3.各組間bFGF和EGF蛋白表達(dá)水平差

6、異的檢驗(yàn)應(yīng)用等級資料秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為有顯著性差異，P＜0.01為有極顯著性差異。 結(jié)果 一、免疫組化結(jié)果： 1.bFGF在3組標(biāo)本中均有表達(dá)，在梗阻穩(wěn)定組、梗阻不穩(wěn)定組的表達(dá)高于對照組，對照組與梗阻穩(wěn)定組及對照組與梗阻不穩(wěn)定組之間均有顯著性差異(P＜0.05)，而在梗阻穩(wěn)定組與梗阻不穩(wěn)定組之間無顯著性差異(P＞0.05)。 2.EGF在3組標(biāo)本中均有陽性表達(dá)，在對照組、梗阻穩(wěn)定組、梗阻不穩(wěn)定組中

7、的表達(dá)均無顯著性差異(P＞0.05)。 二、RT-PCR結(jié)果 1.bFGFmRNA表達(dá)的RT-PCR結(jié)果：bFGFmRNA電泳圖見附圖1，三組病人膀胱逼尿肌細(xì)胞中bFGFmRNA相對表達(dá)水平(表5)在對照組與梗阻穩(wěn)定組及對照組與梗阻不穩(wěn)定組之間均有顯著性差異(P＜0.05)，梗阻穩(wěn)定組與梗阻不穩(wěn)定組之間無顯著性差異(P＞0.05)，而且bFGFmRNA在梗阻穩(wěn)定組和梗阻不穩(wěn)定組中的表達(dá)高于對照組(附圖5)。 2.

8、EGFmRNA表達(dá)的RT-PCR結(jié)果：EGFmRNA電泳圖見附圖2，膀胱逼尿肌細(xì)胞中EGFmRNA的相對表達(dá)水平(表5)在三組病例中兩兩均無顯著性差異(P＞0.05)，見附圖6。 結(jié)論 1.BPH引起B(yǎng)OO后，膀胱逼尿肌中bFGFmRNA及其蛋白表達(dá)均升高并與膀胱平滑肌細(xì)胞的肥大以及平滑肌細(xì)胞間膠原纖維的增多有關(guān)，但與BOO后逼尿肌不穩(wěn)定無直接關(guān)系。 2.BPH引起B(yǎng)OO后，膀胱逼尿肌中EGF蛋白及其mRNA表達(dá)