蛋白冠對三維納米石墨烯內吞途徑及功能影響的研究.pdf

1、肝癌作為高致死率的癌癥，為人類健康帶來很大威脅。傳統(tǒng)的肝癌治療方法有不同程度的局限性，使用新型納米藥物有望為肝癌患者帶來福音。國家納米藥物工程技術研究中心張春副教授課題組以三蝶烯分子為基礎，三取代六苯并蔻而合成新型三維納米石墨烯（Three dimensional nanographene，簡稱NG）。研究發(fā)現(xiàn)NG納米粒在體外是一種可以選擇殺傷肝癌細胞的納米藥物，它具有良好的熒光特性、抗光漂白性、強自組裝能力等。NG納米粒通過巨胞飲和網(wǎng)

2、格蛋白介導的內吞途徑被細胞攝取，最終通過損傷線粒體造成HepG2細胞內ROS的積累，最終產生對HepG2肝癌細胞的選擇性殺傷作用。但之前的實驗并未在體內實驗和有血清環(huán)境中進行，忽略了血清蛋白對其本身性質的影響，而NG納米粒發(fā)揮藥效必須要進入到復雜的生理環(huán)境中去。因此，此實驗通過模擬生物體內的生理環(huán)境，來探究血清蛋白在NG納米粒表面形成蛋白冠后對肝癌細胞功能、內吞途徑的影響。
　　本實驗的主要內容和結論包括：
　　（1）將NG

3、納米粒置于體外模擬的生理環(huán)境中進行孵育，離心收集納米粒后，通過SDS-PAGE凝膠電泳判斷NG納米粒是否與血清蛋白存在相互作用。電泳圖譜顯示NG納米粒能夠與蛋白質發(fā)生相互作用，其吸附蛋白的量與血清濃度成正比。
　　（2）體外證明NG納米?？膳c血清蛋白發(fā)生相互作用。牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，簡稱BSA），是胎牛血清中含量達到38％，通過選用BSA模擬體內生理環(huán)境的蛋白條件，不同濃度的NG納米粒進行孵育后

4、，通過BSA分子中熒光光譜的變化、熒光淬滅機制的分析、紫外光譜和圓二色譜比較后，結果表明NG納米?？赡芘cBSA分子相互作用導致BSA分子構象發(fā)生改變。
　?。?）NG納米粒與血清蛋白相互作用改變NG納米粒在肝癌HepG2細胞的功能及內吞途徑。將含不同濃度血清培養(yǎng)基的NG納米粒作用于HepG2細胞，MTT實驗表明，隨著NG納米粒與血清濃度的增加，對HepG2細胞的殺傷作用顯著下降。內吞實驗證明了HepG2細胞對NG納米粒的攝入量隨血