新生期母嬰分離致大鼠海馬細(xì)胞凋亡的信號(hào)機(jī)制.pdf

1、 目的 建立新生期母嬰分離大鼠模型,觀察母嬰分離對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中凋亡的影響和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、小窩蛋白-1(Caveolin-1)的表達(dá), 初步探討新生期母嬰分離導(dǎo)致大鼠成年后行為發(fā)育異常的可能機(jī)制。
方法 新生Wistar大鼠48只,隨機(jī)分為分離組(N)和對(duì)照組(C),每組24只,N組和C組每組又分為三個(gè)亞組,各8只。N組于出生后第2~21d每天與母鼠分離 3 小時(shí)(8：00~11：

2、00am),C 組不做任何處理,生后一直與母鼠同籠。在出生后第7d、14d和21d斷頭處死大鼠并取其大腦,固定后作冠狀面石蠟切片。采用原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)各組海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡情況,免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(streptavidin-peroxidase,SP)法檢測(cè)組織半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和小窩蛋白-1(Caveolin-1)的

3、表達(dá)。應(yīng)用Image-Pr o Plus (IPP) 6.0 圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組化圖像作半定量分析。
結(jié)果 ⑴以出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn), TUNEL 陽(yáng)性凋亡細(xì)胞和Caspase-3的表達(dá)主要發(fā)生在海馬錐體細(xì)胞；Caveolin-l主要于海馬神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。⑵TUNEL法檢測(cè)凋亡結(jié)果：C組與N組海馬TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞均以7d時(shí)最多,C組與N組均隨日齡增加TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞逐漸減少,同一時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組比較, N組(凋亡

4、指數(shù)Apoptotic intex,AI：7d： 22.62±0.68 vs 18.38±2.26；14d： 12.23±0.97 vs9.51±1.44；1d：8.14±0.93vs5.60±0.63)明顯增多(P<0.01), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(3)Caspase-3蛋白在大鼠海馬組織中的表達(dá)：C組與N組海馬Caspase-3蛋白表達(dá)均以7d時(shí)最多,隨日齡增加而逐漸減少；同一時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組比較(7d： 0.29±

5、0.03 vs 0.2 4±0.01；14d： 0.22±0.01 vs 0.18±0.02；21d： 0.16±0.01vs0.13±0.01)明顯增加(P<0.01), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；Caspase-3 的表達(dá)分布與TUNEL染色基本一致。(4) Caveolin-1蛋白在大鼠海馬組織中的表達(dá)：對(duì)照組與分離組海馬Caveolin-1蛋白表達(dá)均隨日齡增加而逐漸增多,同一時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組比較(7d： 0.13±0.0

6、1 vs 0.12±0.01)無(wú)明顯減少, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(14d： 0.19±0.01 vs 0.22±0.01；21d： 0.24±0.01 vs 0.29± 0.01)明顯減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
結(jié)論 新生期母嬰分離可導(dǎo)致大鼠發(fā)育過(guò)程中海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡和Caspase-3蛋白表達(dá)增多,小窩蛋白(Caveolin-1)表達(dá)減少, 這可能與生命早期母嬰分離導(dǎo)致成年后的行為發(fā)育異常有