Calcineurin抑制劑對(duì)種植體骨整合的影響和機(jī)制研究.pdf

1、第一章Calcineurin抑制劑對(duì)SD大鼠上頜牙槽骨來(lái)源的成骨細(xì)胞的生物學(xué)影響
　　 目的：研究他克莫司和環(huán)孢素A對(duì)SD大鼠上頜牙槽骨來(lái)源的成骨細(xì)胞增殖、分化和礦化的影響。
　　 材料和方法：取6周齡Sprague-Dowley大鼠的上頜牙槽骨組織培養(yǎng)成骨細(xì)胞。傳代后Gimsa染色、ALP染色、茜素紅染色鑒定成骨細(xì)胞。傳代穩(wěn)定后分組：低濃度他克莫司組(TAC-LOW)、高濃度他克莫司組(TAC-HIGH)、環(huán)孢素A組(

2、CYSA)、對(duì)照組(Untreated)。各組給與相應(yīng)劑量的藥物。MMT法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況。qRT-PCR反應(yīng)測(cè)定加藥培養(yǎng)第1周末和第3周末的BGP、Ⅰ型膠原、c-fos、c-jun的mRNA相對(duì)表達(dá)量。第7天、第10天和第14天檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液ALP和鈣離子濃度。培養(yǎng)28d時(shí)用茜素紅染色法檢測(cè)礦化結(jié)節(jié)形成情況。
　　 結(jié)果：CYSA組和TAC-HIGH組成骨細(xì)胞的第10天和第14天的ALP水平下降，鈣離子濃度上升。TAC-L

3、OW組成骨細(xì)胞第14天的ALP水平明顯上升，鈣離子濃度下降。第28天TAC-LOW組鈣化結(jié)節(jié)形成和對(duì)照組無(wú)明顯差異。TAC-HIGH組鈣化結(jié)節(jié)形成較少。TAC-LOW組的c-fos、c-jun、BGP和Col-Ⅰ mRNA第3周明顯表達(dá)增強(qiáng)，TAC-HIGH組和CYSA組的上述基因表達(dá)明顯降低。
　　 結(jié)論：較低濃度的他克莫司促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖、分化和礦化。較高濃度的他克莫司早期促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖，但抑制分化和礦化功能。環(huán)孢素抑制

4、成骨細(xì)胞的增殖、分化和礦化。
　　 第二章他克莫司對(duì)SD大鼠骨密度、骨微結(jié)構(gòu)、骨代謝的影響
　　 目的：研究不同濃度的他克莫司對(duì)SD大鼠的骨密度、骨微結(jié)鉤和骨代謝的影響。材料和方法：30只6周齡Sprague-Dawley大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為低濃度他克莫司組(TAC-LOW)、高濃度他克莫司組(TAC-HIGH)、生理鹽水對(duì)照組(NS)。各組注射相應(yīng)劑量的藥物。在用藥后每15天(第1天、第16天、第31天、第46天、

5、第61天、第76天、第91天)抽血檢測(cè)血清骨形成指標(biāo)ALP、BGP和骨吸收指標(biāo)Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)、可溶性RANKL水平。第3個(gè)月處死動(dòng)物取脛骨標(biāo)本和上頜牙槽骨標(biāo)本，DXA檢測(cè)脛骨近端、上頜牙槽骨的骨密度。microCT檢測(cè)骨微結(jié)構(gòu)的形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)。
　　 結(jié)果：TAC-LOW組脛骨近端骨密度降低，但上頜牙槽骨骨密度沒(méi)有明顯變化，ALP和BGP升高，NTX和RANKL升高，骨小梁數(shù)量增加，骨小梁厚度降低，礦化沉積率升高。T

6、AC-HIGH組脛骨近端骨密度和上頜牙槽骨骨密度降低，ALP和BGP水平降低，NTX和可溶性RANKL水平升高，骨小梁厚度降低，連續(xù)性增加，礦化沉積率降低，骨吸收表面增加。
　　 結(jié)論：低濃度他克莫司同時(shí)促進(jìn)骨形成和骨吸收，脛骨近端和上頜牙槽骨骨密度基本沒(méi)有變化。應(yīng)力區(qū)脛骨近端骨量下降，上頜牙槽骨骨質(zhì)下降不明顯，但骨小梁的結(jié)點(diǎn)、末端和空隙有變化。高濃度他克莫司早期可促進(jìn)骨形成，但很快促進(jìn)骨吸收代謝，導(dǎo)致骨密度下降。
　　

7、 第三章他克莫司作用下對(duì)Beagle’s犬的鈦種植體骨整合的影響
　　 目的：觀察和評(píng)價(jià)不同濃度他克莫司作用下Beagle’s犬的鈦種植體-骨整合界面。
　　 材料和方法：6只Beagle犬分為3組：低濃度他克莫司組(TAC-LOW)、高濃度他克莫司組(TAC-HIGH)、生理鹽水對(duì)照組(NS)。注射相應(yīng)劑量的藥物。2個(gè)月后植入鈦種植體。應(yīng)用共振頻率分析儀測(cè)定種植體穩(wěn)定度。飼養(yǎng)3個(gè)月后處死動(dòng)物，取種植體及周圍骨組織標(biāo)本，

8、microCT檢查種植體骨整合界面。硬組織切片后甲苯氨藍(lán)染色、HA染色和掃描電鏡觀察種植體骨整合界面，并進(jìn)行元素分析。
　　 結(jié)果：TAC-LOW組種植體穩(wěn)定度和對(duì)照組相比沒(méi)有明顯差異。光學(xué)顯微鏡觀察種植體周圍骨組織形態(tài)正常。元素分析顯示骨組織內(nèi)鈦含量較高。TAC-HIGH組種植體穩(wěn)定度明顯降低，傷口愈合不良，EDS和SEM分析顯示骨組織內(nèi)鈦含量較少，而碳、氧元素含量較高。
　　 結(jié)論：較低濃度他克莫司作用下，能夠建立穩(wěn)

9、定度和對(duì)照組無(wú)明顯差異的鈦種植體骨整合。較高濃度的他克莫司作用下，鈦種植體的骨整合沒(méi)有成功。
　　 第四部分應(yīng)用他克莫司的器官移植患者行種植牙治療的病例系列研究
　　 目的：探索在病情穩(wěn)定的CalcinetJrin抑制劑應(yīng)用者人群中進(jìn)行種植牙治療的可行性
　　 方法：13名使用他克莫司或環(huán)孢素A作為免疫抑制劑的肝移植患者進(jìn)行種植牙治療。觀察期為1-3年。通過(guò)影像學(xué)檢查評(píng)估種植術(shù)后3個(gè)月和其后每年的種植體周圍區(qū)骨吸