狼瘡抗凝物測定方法的優(yōu)化選擇及生物變異度研究.pdf

1、本論文共分為兩個部分，對狼瘡抗凝物(LA)的實驗室檢測標(biāo)準化進行了探討。
　　第一部分完成了基于兩個途徑的狼瘡抗凝物檢測方法:改良蝰蛇毒磷脂時間試驗(dRVVT)和硅凝固時間法(SCT)的性能驗證，以及根據(jù)ISTH2009,BCSH2012和CLSI2014(H60)三個狼瘡抗凝物檢測指南，建立APTT(APTT Actin、APTT ActinFSL和APTT-Synthil)，dRVVT和SCT五種不同LA檢測試劑及循環(huán)抗凝物

2、指數(shù)(ICA)、糾正百分比(％C)、標(biāo)準化比值(NR)等結(jié)果表示方法的參考范圍(RI)/Cut-off值，比較不同RI/Cut-off值的敏感性和特異性并評估其臨床應(yīng)用，以期為臨床提供可靠的檢測結(jié)果。目前國內(nèi)外尚無關(guān)于dRVVT和SCT性能驗證的文獻報道。按照CLSI EP5-A2，EP6-A2，EP9-A2文件及《衛(wèi)生部臨床血液學(xué)檢測常規(guī)項目分析質(zhì)量要求WS/T406-2012文件》標(biāo)準，對兩種狼瘡抗凝物檢測方法精密度、攜帶污染率、樣

3、本穩(wěn)定性、方法學(xué)比對及參考范圍建立進行全面評估。同時驗證了乏血小板血漿中血小板計數(shù)和樣本穩(wěn)定性。50例乏血小板血漿中血小板計數(shù)為(0-9)×109/L，滿足指南＜10×109/L要求。兩種抗凝物檢測方法在四個時間點檢測結(jié)果間P值＞0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。兩種試劑批內(nèi)精密度為0.79％-2.35％，小于2.50％。dRVVT試驗批間精密度為2.76％-3.53％，SCT試驗批間精密度為6.23％-7.02％。所有檢測方法攜帶污染率絕對

4、值＜3.00％。dRVVT和SCT標(biāo)準化比值計算所得RI/Cut-off值分別為1.24和1.16。不同儀器同種方法，和相同儀器不同方法之間比對數(shù)據(jù)相關(guān)良好，相關(guān)系數(shù)＞0.900。兩種檢測方法標(biāo)準化比值之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，同時兩種方法陰陽性判斷間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。dRVVT和SCT兩種狼瘡抗凝物檢測方法適用于臨床樣本檢測。
　　三種APTT試劑ICA對LA檢測的敏感性均低于55.0％，APTT試劑中，APTT-SS（二氧化硅激活

5、）陽性似然比大于鞣花酸為激活劑的APTT試劑。同樣為鞣花酸激活劑的APTT試劑，Actin FSL高于Actin。dRVVT三種結(jié)果表示方法的敏感性分別為70.3％～93.1％，SCT三種結(jié)果表示方法的敏感性分別為55.4％～79.2％。除外APTT-Actin和SCT試劑ICA（RI/Cut-off值為第97.5百分位數(shù)），其余試劑的特異性均大于90.0％。以dRVVT檢測結(jié)果1.17～1.50為弱陽性判斷標(biāo)準，兩種以鞣花酸為激活劑的

6、APTT試劑敏感性均低于16.0％，dRVVT以第97.5百分位數(shù)為RI/Cut-off值的敏感性最高為71.2％。APTT-SS在各疾病組中均具有較高陽性率，dRVVT標(biāo)準化比值及其組合在抗磷脂綜合征(APS)中陽性率最高。APTT-SS和1∶1混合試驗在凝血因子缺乏(FD)中陽性率分別為92.5％和7.5％。SCT在FD、口服抗凝劑(OAT)和健康人群(HS)中陽性率為0。傳統(tǒng)的篩選試驗-1∶1混合試驗-確證試驗和標(biāo)準化比值均與血栓

7、形成相關(guān)，比值比(OR)值在4.400-5.667之間。dRVVT和SCT標(biāo)準化比值與血栓形成OR值大于其他試驗流程。1∶1混合試驗因為稀釋效應(yīng)對弱陽性LA檢測能力不足，但能有效區(qū)分APTT延長是否由凝血因子缺乏導(dǎo)致。篩選試驗-1∶1混合試驗-確證試驗和標(biāo)準化比值均與APS患者血栓形成相關(guān)。
　　本次研究結(jié)果顯示，dRVVT標(biāo)準化比值具有最佳臨床診斷效能。同時，LA檢測結(jié)果的解釋需同時考慮患者分析前因素。
　　本研究的第二部

8、分旨在調(diào)查血栓與止血特殊檢測項目狼瘡抗凝物(LA)、蛋白S(PS)、蛋白C(PC)、抗凝血酶(AT)和血管性血友病因子抗原(vWF∶Ag)的生物學(xué)變異。采集25例健康成年人（男性13例，女性12例，年齡25-40歲）在研究第1天，第3天和第5天的8:00、12:00和16:00共9個時間點采集枸櫞酸鹽抗凝靜脈血，同時收集健康成年人正常血漿，分別檢測上述5個項目。LA結(jié)果以dRVVT篩選（秒），dRVVT篩選比率(R)和標(biāo)準化dRVVT比

9、率(NR)三種形式表示。計算分析變異(CVA)，個體內(nèi)變異(CVw)和個體間變異(CVG)，分析一天內(nèi)和一周內(nèi)各采血時間點結(jié)果是否存在差異，并計算個體指數(shù)(Ⅱ)及參考范圍變化值(RCV)。PS，PC，AT-Ⅲ，vWF∶Ag，dRVVT篩選（秒），dRVVT篩選比率(R)和標(biāo)準化dRVVT比率(NR)的CVA均小于1/2CVw，CVw分別為4.59％-7.45％，CVG分別為4.28％-31.71％。vWF∶Ag的CVw(5.84％)和C

10、VG(31.71％)略高于文獻數(shù)據(jù)，與受試者人群ABO血型分布有關(guān)，進一步強調(diào)vWF∶Ag應(yīng)根據(jù)血型建立非O型和O型兩個參考范圍。同一天內(nèi)不同時間點和天間采血結(jié)果間方差分析P值為0.065～0.922(P＞0.05)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。5個項目個體指數(shù)(Ⅱ)結(jié)果為0.18～0.71，提示上述5個凝血參數(shù)主要用于觀察疾病進展或判斷預(yù)后。
　　本研究首次得出了中國人群PS，PC，AT-Ⅲ，vWF∶Ag和LA的生物學(xué)變異數(shù)據(jù)，其中LA生