二甲基甲酰胺對(duì)V79細(xì)胞的毒性作用研究.pdf

1、目的：二甲基甲酰胺(N, N-dimethylformamide, DMF)是一種低毒類的有機(jī)溶劑，是一種重要的化工原料，目前廣泛應(yīng)用于有機(jī)合成、石油提煉等工業(yè)行業(yè)，以及醫(yī)藥和其他行業(yè)。隨著現(xiàn)代工業(yè)的發(fā)展，DMF的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，職業(yè)接觸人員也不斷增加，這給接觸DMF的作業(yè)人群帶來了健康安全隱患。本研究通過了解二甲基甲酰胺（DMF）對(duì)中國倉鼠肺細(xì)胞（V79細(xì)胞）的細(xì)胞毒性、DNA損傷作用以及細(xì)胞毒性機(jī)制，試圖探討二甲基甲酰胺可能的細(xì)胞

2、損傷機(jī)制，為提出有效的保護(hù)職業(yè)暴露人群健康的措施提供依據(jù)。
　　方法：（1）以體外培養(yǎng)V79細(xì)胞為研究對(duì)象，采用四氮唑鹽比色分析法（MTT法）檢測(cè)不同濃度的DMF對(duì)V79細(xì)胞作用不同時(shí)間段后，細(xì)胞存活率的變化，了解濃度-時(shí)間-毒性效應(yīng)關(guān)系；（2）采用碘化吡啶（PI)染色觀察細(xì)胞周期分布狀況，了解DMF對(duì)V79細(xì)胞周期的影響；（3）用堿性單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)（SCGE）檢測(cè)不同濃度 DMF在作用不同時(shí)間段后，V79細(xì)胞的DNA單鏈斷裂

3、的損傷情況。（4）用中性單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)不同濃度DMF在作用不同時(shí)間段后，V79細(xì)胞的DNA雙鏈斷裂的情況；(5)用流式細(xì)胞術(shù)DCFH-DA法檢測(cè)不同濃度DMF處理V79細(xì)胞后活性氧（ROS）含量比的變化。
　　結(jié)果：(1)MTT結(jié)果顯示，各組V79細(xì)胞存活率隨染毒濃度及染毒時(shí)間的增加而下降，與陰性組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），存在明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系（6h,β=-0.002，P＜0.05;12h,β=-0.00

4、3，P＜0.05;24h,β=-0.003，P＜0.05）。(2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)，經(jīng)DMF作用24h后V79細(xì)胞周期發(fā)生了明顯的變化。每一染毒時(shí)間段內(nèi)，隨著DMF染毒濃度的增加，G1期細(xì)胞的構(gòu)成比降低；而S期細(xì)胞和G2期細(xì)胞的比例則隨著DMF濃度的升高而升高，各染毒組與陰性對(duì)照組比較均有差異性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。(3)堿性單細(xì)胞凝膠電泳結(jié)果顯示，彗星拖尾率、尾長(zhǎng)、Olive尾距、尾部DNA百分含量隨著DMF

5、染毒濃度的增加而增大，經(jīng)SNK方差分析，各染毒濃度組和同組陰性組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。(4)中性單細(xì)胞凝膠電泳結(jié)果顯示，彗星拖尾率、尾長(zhǎng)、Olive尾距、尾部DNA百分含量隨著DMF染毒濃度的增加而增大，經(jīng)SNK方差分析，各染毒濃度組和同組陰性組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（5）經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，隨著DMF染毒濃度的升高，活性氧（ROS）含量相應(yīng)增高并呈線性相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論：（1）DMF能夠明

6、顯抑制V79細(xì)胞增殖，存在正向的劑量-效應(yīng)關(guān)系，并能引起DNA損傷。（2）DMF染毒可以引起細(xì)胞周期阻滯，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。（3）低濃度的DMF0.5mmol/L染毒6h即可引起細(xì)胞單鏈斷裂。（4）DMF染毒后可造成細(xì)胞雙鏈斷裂，導(dǎo)致DNA損傷。（5）DMF可引起V79細(xì)胞內(nèi)活性氧含量增加。本次研究結(jié)果顯示，DMF可引起體外培養(yǎng)的V79細(xì)胞存活率下降，通過引起DNA單雙鏈斷裂導(dǎo)致細(xì)胞損傷，細(xì)胞內(nèi)活性氧ROS含量的增加可能是導(dǎo)致DNA損傷的一