基于適體和DNA連續(xù)復(fù)制的生物傳感器.pdf

1、本論文的主要內(nèi)容是基于適體的特異性并利用納米技術(shù)與DNA分子雜交技術(shù)、DNA循環(huán)復(fù)制相結(jié)合,研制出高靈敏度、高選擇性的新型適體傳感器,對特定生物分子如凝血酶、腺苷、溶菌酶進(jìn)行選擇性地識別和測定,為許多疾病的臨床早期診斷提供理論基礎(chǔ)。本文著重進(jìn)行了以下幾種靶物質(zhì)的適體傳感器的研制和性質(zhì)研究:
　　 1.以粒徑為4 mn左右的硫化鎘納米顆粒為標(biāo)志物,設(shè)計(jì)了以適體識別為基礎(chǔ)、以兩步DNA復(fù)制步驟構(gòu)成的循環(huán)反應(yīng)放大體系,用于進(jìn)行凝血酶的

2、檢測。該適體傳感器對凝血酶有良好的選擇性,確定檢測限約為5×10-14 M,從2×10-14M到10-12 M的范圍內(nèi)可以對凝血酶進(jìn)行定量測定。
　　 2.以粒徑為5 nm左右的硫化鉛納米顆粒為標(biāo)志物,設(shè)計(jì)了以適體識別為基礎(chǔ)、以兩步DNA復(fù)制步驟構(gòu)成的循環(huán)反應(yīng)放大體系,用于進(jìn)行腺苷的檢測。該傳感器對腺苷有良好的選擇性,確定檢測限約為5×10-11 M,從2×10-11M到10-9M的范圍內(nèi)可以對腺苷進(jìn)行定量測定,并可以對血清樣品

3、中的腺苷進(jìn)行檢測的通過高效液相的對比檢測,驗(yàn)證了該方法的準(zhǔn)確性和高靈敏度。
　　 3設(shè)計(jì)新型循環(huán)體系,同時(shí)使用剪切酶和復(fù)制酶,在體系中實(shí)行了多層次放大和8個(gè)循環(huán),設(shè)計(jì)的適體傳感器對溶菌酶有良好的選擇性,確定檢測限約為8.1×10-15M,并對人類血清樣品和尿液樣品中的溶菌酶進(jìn)行檢測,體現(xiàn)了該方法的準(zhǔn)確性和實(shí)用性。
　　 本文所創(chuàng)建的是一種以適體為基礎(chǔ)依靠DNA循環(huán)復(fù)制替換的傳感器,在整個(gè)復(fù)制體系中,實(shí)現(xiàn)了多個(gè)多層次的循環(huán)

4、,并且這個(gè)大的體系僅由唯一的靶物質(zhì)引發(fā)反應(yīng),并且反應(yīng)過程簡單,只需要混合在一起“一鍋煮”。本文中不僅實(shí)現(xiàn)了DNA片段的復(fù)制替換,并且實(shí)現(xiàn)新的大分子與核酸(適體鏈)的替換,并且得到充分驗(yàn)證,整個(gè)大體系也明顯改善了檢測的靈敏度,在逐級循環(huán)過程中,大大提高了傳感器的靈敏度,本體系的選擇性非常好,因?yàn)檎麄€(gè)體系的設(shè)計(jì)是在適體基礎(chǔ)上,適體的特異性選擇得到了充分的驗(yàn)證,本傳感器可以實(shí)現(xiàn)特定蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的檢測,并有望延伸到生物醫(yī)學(xué)研究或臨床診斷等